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篇1

【關(guān)鍵詞】 乙型肝炎； 血清標(biāo)志物； 檢測(cè)； 評(píng)價(jià)

當(dāng)前我國乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）的攜帶率約為10%左右，臨床上用于乙型肝炎病毒血清免疫學(xué)標(biāo)志物（HBV-M）檢測(cè)的方法很多，國內(nèi)傳統(tǒng)檢測(cè)手段主要使用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA），近年來諸如時(shí)間分辨熒光分析法（TRFIA）、微粒子酶免疫分析法（MEIA）以及電化學(xué)發(fā)光法（ECLIA）等新式檢測(cè)手段也逐漸應(yīng)用于實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)中。本次試驗(yàn)選用ELISA、TRFIA和ECLIA三種方法對(duì)乙型肝炎血清標(biāo)志物進(jìn)行檢測(cè)，旨在對(duì)不同方法學(xué)檢測(cè)結(jié)果之間的一致性進(jìn)行評(píng)價(jià)。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象 選取筆者所在醫(yī)院經(jīng)羅氏ECLIA檢測(cè)證實(shí)的100例乙型肝炎病毒（HBV）感染者的血清，患者均符合慢性乙型肝炎診斷標(biāo)準(zhǔn)［1］，其中男65例，女35例；年齡16～50歲；另選取50例健康體檢者的血清。

1.2 方法

1.2.1 儀器試劑 ELISA檢測(cè)選用ALISEI全自動(dòng)酶標(biāo)儀（意大利）以及科華生物試劑盒（上海）；TRFIA檢測(cè)選用WALLAC DELFIA-1235時(shí)間分辨免疫熒光分析儀（芬蘭）和新波生物試劑盒（上海）；ECLIA檢測(cè)選用羅氏E601電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀（德國）及其標(biāo)準(zhǔn)配置試劑。

1.2.2 檢測(cè)方法 檢測(cè)操作均按照儀器操作說明書以及試劑盒說明書進(jìn)行。本組待檢血清樣本均用3種方法進(jìn)行檢測(cè)，每次檢測(cè)時(shí)均帶陰、陽性質(zhì)控（質(zhì)控來源為上海市臨床檢驗(yàn)中心以及羅氏公司）。檢測(cè)結(jié)果的判定以試劑說明書中規(guī)定的Cut-off值作為標(biāo)準(zhǔn)，應(yīng)用夾心法檢測(cè)時(shí)，結(jié)果大于Cut-off值為陽性；應(yīng)用競(jìng)爭(zhēng)法檢測(cè)時(shí)，結(jié)果小于Cut-off值為陽性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 不同檢測(cè)方法結(jié)果的一致性采用Kappa檢驗(yàn)，一致性的強(qiáng)弱程度按照Landis以及Koch參照Kappa系數(shù)的大小進(jìn)行判斷，共分為6個(gè)區(qū)段，Kappa系數(shù)小于0時(shí)為極差；0～0.2為微弱；0.21～0.4為弱，0.41～0.6為中度；0.61～0.8為高度；0.81～1.0為極強(qiáng)［2］；抽樣誤差的排除應(yīng)用μ檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 使用ELISA法與ECLIA法檢測(cè)乙型肝炎血清標(biāo)志物結(jié)果比較 見表1。

2.2 使用TRFIA法與ECLIA法檢測(cè)乙型肝炎血清標(biāo)志物結(jié)果比較 見表2。

3 討論

當(dāng)前實(shí)驗(yàn)室對(duì)乙型肝炎血清標(biāo)志物的檢測(cè)方法中，ELISA法適用于定性檢測(cè)，TRFIA、ECLIA等適用于定量檢測(cè)，由于不同實(shí)驗(yàn)室在應(yīng)用這些方法時(shí)的溯源性以及采用的單位各不相同，因此結(jié)果相差較大，給患者的就診以及臨床醫(yī)生對(duì)報(bào)告結(jié)果的正確解讀造成了不便，基于此，不同方法學(xué)檢測(cè)結(jié)果之間的相關(guān)性評(píng)價(jià)就顯得十分必要。本次研究所選用的3種檢測(cè)方法中，ECLIA法是當(dāng)前特異性和敏感性最好的檢測(cè)方法，故將其檢測(cè)結(jié)果與其他方法進(jìn)行比較，以評(píng)價(jià)不同方法學(xué)檢測(cè)結(jié)果之間的一致性。

根據(jù)本次研究結(jié)果顯示，ELISA法和ECLIA法在HBeAg項(xiàng)目上顯示極強(qiáng)一致性，剩余4項(xiàng)均為高度一致性，顯示ELISA法在臨床應(yīng)用中檢測(cè)率良好［3］，但HBsAg項(xiàng)目上有8例漏診，提示該法在敏感性方面尚有不足，在血站以及手術(shù)等對(duì)結(jié)果極為敏感的情況下不適合應(yīng)用此法，但是ELISA法試劑成本較低，因此適用于普通人群篩查或者經(jīng)濟(jì)狀況較差的患者。TRFIA法與ECLIA法檢測(cè)結(jié)果在HBsAg、HBeAg、抗HBe以及抗HBc這4個(gè)項(xiàng)目上具有極強(qiáng)的一致性，在抗HBs項(xiàng)目上具有高度一致性，這一結(jié)果亦與國內(nèi)文獻(xiàn)［4］報(bào)道基本一致。

綜上所述，酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）、時(shí)間分辨熒光分析法（TRFIA）以及電化學(xué)發(fā)光法（ECLIA）三種方法在乙型肝炎血清標(biāo)志物檢測(cè)方面一致性較高，有利于實(shí)驗(yàn)室之間進(jìn)行結(jié)果互認(rèn)。

參 考 文 獻(xiàn)

［1］ 中華醫(yī)學(xué)會(huì)傳染病與寄生蟲病學(xué)分會(huì)、肝病學(xué)分會(huì).病毒性肝炎防治方案.中華肝臟病雜志，2010,（8）：324-329.

［2］ 夏邦世.時(shí)間分辨免疫熒光技術(shù)檢測(cè)HBV血清標(biāo)志物臨床應(yīng)用評(píng)價(jià).臨床醫(yī)學(xué)，2006，33（3）：6-7.

［3］ 周迎春，陳輝，關(guān)平，等.3種方法測(cè)定低濃度乙型肝炎病毒表面抗原效果評(píng)價(jià).檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2007，4（11）：1070-1071.

［4］ 陳佑明，黃敬，熊符，等.時(shí)間分辨熒光免疫分析法和免疫放射分析法檢測(cè)HBsAg的對(duì)比分析.標(biāo)記免疫分析與臨床，2006，13（1）：50-51.

（收稿日期：2011-05-23）

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表1 ELISA法與ECLIA法檢測(cè)乙型肝炎血清標(biāo)志物結(jié)果比較

注：所有項(xiàng)目P

篇2

【關(guān)鍵詞】化學(xué)發(fā)光免疫法；放射免疫法；AFP；分析性能；實(shí)驗(yàn)方法

doi：10.3969/j.issn.1004-7484（s）.2014.01.672文章編號(hào)：1004-7484（2014）-01-0556-02

化學(xué)發(fā)光免疫分析是一種新型的標(biāo)記免疫分析技術(shù)，是繼放射免疫、酶免疫、熒光免疫分析等分析方法之后的新一代標(biāo)記免疫分析技術(shù)，是將免疫測(cè)定與化學(xué)發(fā)光相結(jié)合的新型技術(shù)。整個(gè)過程均在全封閉的反應(yīng)體系中進(jìn)行，且能夠全自動(dòng)操作，儀器具有反應(yīng)迅速，靈敏度高，檢測(cè)限低等優(yōu)點(diǎn)，總的來說包括抗原抗體特異性結(jié)合與化學(xué)發(fā)光兩部分過程[1]。甲胎蛋白（AFP）是原是胚胎的肝細(xì)胞，嬰兒兩個(gè)月便逐漸消失，但近些年發(fā)現(xiàn)AFP在部分成人體內(nèi)出現(xiàn)，并發(fā)現(xiàn)它是原發(fā)性肝癌最靈敏，也是最特異的腫瘤標(biāo)志物。為了進(jìn)一步考察該儀器對(duì)AFP生物檢測(cè)限和AFP功能靈敏度的測(cè)量，我院參照IUPAC（國際純粹和應(yīng)用化學(xué)聯(lián)合會(huì)）的規(guī)定評(píng)價(jià)方案，現(xiàn)將60例臨床送檢血清標(biāo)本的臨床資料進(jìn)行報(bào)道如下：

1材料與實(shí)驗(yàn)方法

1.1應(yīng)用材料與儀器檢測(cè)樣選用我院2013年1月至2013年3月的60例臨床送檢血清標(biāo)本。

儀器采用美國Bayer Centaur 240全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光儀，并配套相關(guān)檢測(cè)試液（包括標(biāo)記的抗原抗體、含磁性的固相顆粒、稀釋液、AFP清洗液、發(fā)光試劑等），均采用拜耳公司提供的試劑。放射免疫法采用上海產(chǎn)的γ計(jì)數(shù)儀（SN-682 型），并配套運(yùn)用 AFP 試劑盒（中國原子能科學(xué)研究所研制）。

1.2方法檢測(cè)時(shí)運(yùn)用AFP稀釋液作為空白樣品，取一新鮮的血清作為試樣，做重復(fù)性實(shí)驗(yàn)，記錄每次檢測(cè)的濃度值和光強(qiáng)度值。核實(shí)兩者的精密度、靈敏度與檢出限等，數(shù)據(jù)處理采用線性回歸處理。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法根據(jù)SPSS13.0軟件對(duì)提供的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)的分析，計(jì)量資料為t檢驗(yàn)，對(duì)所有統(tǒng)計(jì)結(jié)果采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（χ±s）的形式表示，運(yùn)用軟件進(jìn)行處理（檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05，雙側(cè)檢驗(yàn)）作為統(tǒng)計(jì)學(xué)的評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)的差異。

2結(jié)果

2.1線性試驗(yàn)以AFP稀釋液作為空白試劑，再根據(jù)要求將標(biāo)準(zhǔn)溶液稀釋成不同濃度的溶液，放射免疫法取5ppb、10ppb、50ppb、200ppb、400ppb為標(biāo)準(zhǔn)濃度測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)曲線，化學(xué)發(fā)光免疫法取5ppb、10ppb、50ppb、200ppb、400ppb、800ppb為標(biāo)準(zhǔn)濃度測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果兩組數(shù)據(jù)均有較好的線性關(guān)系。

2.2重復(fù)性試驗(yàn)取一新鮮的血清作為試樣，兩種方法均進(jìn)樣10次，查看兩者的重復(fù)性差別，兩組儀器均能滿足RSD

2.3相關(guān)性試驗(yàn)采用2.2中的方法用上述兩種檢測(cè)法對(duì)受檢血清標(biāo)本進(jìn)行適當(dāng)定量分析。結(jié)果顯示，兩種方法無顯著差異（P>0.05），且相關(guān)系數(shù)r=0.995，回歸方程為y=-1.059+0.921x，兩組方法所得數(shù)據(jù)的相關(guān)性良好。

2.4回收率試驗(yàn)取混合血清后，再加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)定值血清，用兩組方法分別對(duì)其進(jìn)行平均回歸率實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)得出，放射免疫法的回收率為91.2-108.1%，化學(xué)發(fā)光免疫法的回收率為92.0-107.8%?；瘜W(xué)發(fā)光免疫法略優(yōu)于放射免疫法。

2.5檢出限以每次做的空白R(shí)LUs為基值，以該空白的RLUs值的3倍作為樣品中具有的AFP量，或稱本法的檢測(cè)低限。分別對(duì)兩種方法進(jìn)行檢出限測(cè)量，得出化學(xué)發(fā)光免疫法的檢出限為0.95ppb，放射免疫法的檢出限為5ppb?；瘜W(xué)免疫法在檢出限上明顯優(yōu)于放射免疫法[2]。

2.6精密度試驗(yàn)取三個(gè)梯度濃度（分為低、中、高三個(gè)梯度）的試劑分別進(jìn)行精密度實(shí)驗(yàn)，并運(yùn)用兩種方法進(jìn)行整理對(duì)比，見表1。

3討論

化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)作為一種新型的分析技術(shù)，既具有運(yùn)用發(fā)光檢測(cè)時(shí)的高度敏感性，也同時(shí)具有免疫分析時(shí)的高度特異性。其原理為將激發(fā)態(tài)分子回到基態(tài)時(shí)所釋放而產(chǎn)生的發(fā)光現(xiàn)象，再運(yùn)用化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)來為抗原抗體的結(jié)合反應(yīng)做指示系統(tǒng)，從而進(jìn)行定量檢測(cè)抗原或抗體的濃度方法，是一種直接的運(yùn)用發(fā)光劑標(biāo)記抗體的免疫分析方法。由于運(yùn)用丫啶酯發(fā)光劑的優(yōu)點(diǎn)可以很好的減少非特異性干擾，反應(yīng)較為簡(jiǎn)單且迅速，反應(yīng)靈敏度高，據(jù)有關(guān)資料顯示，該發(fā)光劑也很穩(wěn)定（有效期可長達(dá)1年以上）。

放射免疫法是目前臨床上較為常用的分析方法，其原理是放射性標(biāo)記的抗原和非標(biāo)記抗原全部同時(shí)與限量的特異性抗體進(jìn)行競(jìng)爭(zhēng)性可逆的結(jié)合反應(yīng)，反應(yīng)的靈敏度較低，標(biāo)記物的有效期也較短（一般只有1個(gè)月左右）。從工作人員角度來說，也會(huì)對(duì)他們的身體健康帶來很多負(fù)面影響。從以上的結(jié)論可以看出，兩種方法的檢測(cè)結(jié)果無顯著性差異，且相關(guān)性較好。但從檢出限、靈敏度、精密度等方面進(jìn)行比較，化學(xué)發(fā)光免疫法就明顯優(yōu)于放射免疫法，而且其試劑穩(wěn)定性高、毒性小，對(duì)環(huán)境無過大污染，方便、易操作且安全。

本實(shí)驗(yàn)采用的全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光儀可以很好地對(duì)血清標(biāo)本進(jìn)行很好地采樣，處理和檢測(cè)，基本上能夠達(dá)到樣品隨到隨測(cè)，檢測(cè)迅速，很快可以得到檢測(cè)結(jié)果，大大縮短了檢測(cè)所用的時(shí)間，能滿足臨床上的檢驗(yàn)需求[3]。從上述數(shù)據(jù)可以確認(rèn)，該方法的檢測(cè)結(jié)果均可以達(dá)到臨床運(yùn)用水平，又基于其高度特異性、靈敏度高、重復(fù)性好等優(yōu)勢(shì)，值得臨床進(jìn)一步廣泛應(yīng)用。

參考文獻(xiàn)

[1]張紅祥.化學(xué)發(fā)光免疫法與放射免疫法檢測(cè)血清AFP臨床分析[J].中國現(xiàn)代藥學(xué)應(yīng)用，2010，4（7）：41-42.

篇3

丁家華　，孫耘玉　王駿　程堅(jiān)　趙剛

【摘要】

本研究探討一種新型亞甲基四氫葉酸還原酶（MTHFR）單核苷酸多態(tài)性(SNP)檢測(cè)方法，并用其檢測(cè)惡性血液病遺傳易感性。根據(jù)cDNA芯片原理制作一種目的基因芯片，利用雙色熒光探針雜交進(jìn)行SNP位點(diǎn)檢測(cè)，測(cè)序法對(duì)該芯片檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性進(jìn)行驗(yàn)證，并以此對(duì)來自中國江蘇地區(qū)的157例健康對(duì)照和127例惡性血液病患者(30例多發(fā)性骨髓瘤，28例非霍奇金淋巴瘤，22例急性淋巴細(xì)胞白血病，40例急性髓系白血病，7例慢性髓系白血病)的MTHFR基因C677T多態(tài)位點(diǎn)進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果表明，為野生型、雜合型和突變型的疊加熒光分別顯示為綠色、黃色和紅色。測(cè)序結(jié)果與芯片結(jié)果吻合。677C和677T在病例和對(duì)照組的基因頻率分別為58.7%、66.9%、41.3%和33.1%，差異有顯著性（χ2=4.077， P=0.043）。677TT基因型發(fā)生MM相對(duì)風(fēng)險(xiǎn)明顯增加（OR=4.21；95%CI=1.50-11.83；P=0.006）。結(jié)論：本芯片檢測(cè)方法準(zhǔn)確、高通量且價(jià)格低廉，適用于大規(guī)模樣本SNP調(diào)查；C677T多態(tài)改變影響惡性血液病的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。677TT基因型是MM的易感因素。

【關(guān)鍵詞】 單核苷酸多態(tài)性； 基因芯片； 雙色熒光雜交； 亞甲基四氫葉酸還原酶； 惡性血液病

A New Method for 5，10-Methylenetetrahydrofolate Reductase Single Nucleotide Polymorphisms Genotyping Used to Study Susceptibility of Hematological Malignancy

AbstractThe aim of this study was to set up a new method for 5，10- Methylenetetrahydrofolate reductase (MTHFR) single nucleotide polymorphisms (SNP) genotyping， and to investigate the hereditary susceptibility of hematological malignancy. Prepared an aimed gene microarray based on cDNA microarray theory， dual- color fluorescenece hybri- dization was used to detect SNP loci， and DNA sequencing was performed to confirm the results. The MTHFR C677T SNP loci of 157 controls and 127 patients with hematological malignancies (30 multiple myeloma， 28 non- Hodgkin′s lymphoma， 22 acute lymphoblastic leukemia， 40 acute myeloid leukemia， 7 chronic myeloid leukemia) from Jiangsu province were detected. The results showed that after overlapping， homozygous wild type， heterozygote type and homozygous mutant type yielded green， yellow and red fluorescence， respectively. DNA sequencing validated these results. The allele frequency of 677C and 677T in patients and controls were 58.7% and 66.9%， 41.3% and 33.1% respectively， showing statistically significant difference (χ2=4.077， P=0.043). 677TT genotype showed a significantly higher risk of MM (OR=4.21; 95%CI=1.50-11.83; P=0.006). It is concluded that this microarray- based method is accurate， high- throughput and inexpensive， suitable for SNP genotyping in a large numbeer of inpiduals. C677T polymorphisms influence the risk of hematological malignancies. 677TT genotype is susceptive to MM.

Key words single nucleotide polymorphism; gene microarray; dual- color fluorescenece hybridization; 5，10- methylenetetrahydrofolate reductase; hematological malignancy

染色體DNA序列的某個(gè)位點(diǎn)上存在的單個(gè)堿基變化如果在人群中的發(fā)生頻率超過1%，即為單核苷酸多態(tài)性（SNP）。表達(dá)基因平均每1 000 bp即出現(xiàn)一個(gè)SNP位點(diǎn)，是人類基因組序列變異的主要形式。在不同的人群中，SNP的頻率分布有差異，這些差異可以代表某一種族或人群間的遺傳差異。研究SNP有助于解釋個(gè)體的表型差異、不同群體和個(gè)體對(duì)疾病，特別是對(duì)復(fù)雜疾病的易感性，以及對(duì)各種藥物的耐受性和對(duì)環(huán)境因子的反應(yīng)性。因此，有必要建立一種準(zhǔn)確、費(fèi)用低、適合大樣本的SNP檢測(cè)方法。近年來研究表明，葉酸缺乏和（或）葉酸代謝異?？蓪?dǎo)致多種腫瘤的發(fā)生。亞甲基四氫葉酸還原酶（5，10-methylenetetrahydrofolate reductase，MTHFR）是葉酸代謝的關(guān)鍵酶，其基因C677T位點(diǎn)多態(tài)改變引起酶活性下降，已被證實(shí)它與多種腫瘤的易感性有關(guān)。為此我們建立一種芯片檢測(cè)方法，并對(duì)惡性血液病患者的C677T位點(diǎn)進(jìn)行初步分析。

材料和方法

研究對(duì)象

127例病例樣本取自東南大學(xué)附屬中大醫(yī)院、江蘇省人民醫(yī)院和南京鼓樓醫(yī)院2004年1月至2004年11月收治的血液腫瘤患者。在127例病例中多發(fā)性骨髓瘤（MM）30例，非霍奇金淋巴瘤（NHL）28例，急性淋巴細(xì)胞白血病（ALL）22例，急性髓系白血?。ˋML）40例，慢性髓系白血?。–ML）7例。所有MM經(jīng)骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)、血或尿M蛋白、本- 周氏蛋白檢測(cè)及扁骨X光片確診，NHL經(jīng)組織病理確診，白血病患者經(jīng)骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)、免疫學(xué)、細(xì)胞遺傳學(xué)確診，所有患者排除已行異基因造血干細(xì)胞移植。157例健康對(duì)照樣本取自同期在東南大學(xué)附屬中大醫(yī)院、江蘇省人民醫(yī)院健康查體人群，對(duì)照人群排除惡性腫瘤、冠心病。所有標(biāo)本均為EDTA抗凝的外周血。病例組男76人，女51人，年齡18-79歲，平均年齡47.39歲；對(duì)照組男98人，女59人，年齡22-75歲，平均年齡48.55歲。兩組性別、年齡分布無顯著差異（P值分別為0.657和0.533）。常規(guī)酚- 氯仿法提取基因組DNA。

目的片段的PCR擴(kuò)增和純化

采用已報(bào)道的引物序列［1］，C677T位點(diǎn)的PCR反應(yīng)體系為30 μl，其中含10×的緩沖液3 μl，25 mmol/L的Mg2+溶液2 μl，10 mmol/L的dNTP 0.6 μl，10 μmol/L的雙側(cè)引物各1 μl ，1.25 U的Taq DNA聚合酶（5 U/L），提取的基因組DNA 1 μl。擴(kuò)增條件：94℃預(yù)變性5分鐘，94℃變性30秒，62℃退火30秒，72℃延伸30秒，共35個(gè)循環(huán)，72℃延伸7分鐘。擴(kuò)增在Gene Amp 2400 PCR System上進(jìn)行。QIAquick PCR產(chǎn)物純化試劑盒純化PCR產(chǎn)物。分光光度計(jì)對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行定量并將產(chǎn)物溶于3×SSC緩沖液中，濃度為300 ng/μl。

目的片段芯片的制備及雜交

將PCR產(chǎn)物通過PixSys 5500點(diǎn)樣儀（Cartesian Technology Inc產(chǎn)品）點(diǎn)于氨基玻片上。點(diǎn)樣后玻片水化30分鐘，100℃快干2秒，400 mJ紫外交聯(lián)，80℃干烤2小時(shí)。野生型探針677CC：5′- Cy3-CGGGAGCCGATTT- 3′，突變型探針677TT：5′- Cy3-CGGGAGTCGATTT- 3′。將熒光標(biāo)記探針1 μmol/L（野生型和突變型探針各半）與雜交液（Telechem）按體積1∶3混合。在潮濕的雜交盒中37℃雜交2小時(shí)。室溫下分別用2×SSC- 0.1% SDS 和 0.1×SSC -0.1% SDS清洗5分鐘，滅菌雙蒸水清洗2分鐘后吹干玻片。用ScanArray Lite 微陣列分析系統(tǒng) （BioScience Company產(chǎn)品）進(jìn)行芯片掃描。

統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

病例組和對(duì)照組的MTHFR基因型的頻率差異以χ2檢驗(yàn)確定，P

結(jié)果

樣品微陣列的分析

雙色熒光雜交進(jìn)行SNP分型原理為經(jīng)過雜交掃描后，野生型樣本能獲得一個(gè)較強(qiáng)的Cy3熒光（綠色熒光），突變型樣本獲得一個(gè)較強(qiáng)的Cy5熒光（紅色熒光），雜合型樣本既可獲得Cy3熒光又可獲得Cy5熒光，經(jīng)過疊加后能顯示一個(gè)較強(qiáng)的“黃色”熒光。我們分析了惡性血液病的6個(gè)樣本的C677T位點(diǎn)。附圖A、B和C中顯示了6個(gè)樣品的熒光信號(hào)和附圖D中顯示了這些樣品的熒光信號(hào)的強(qiáng)度值。從圖中可以看到4個(gè)樣品（1-4）顯示了較強(qiáng)的Cy3熒光信號(hào)，并且顯示了和背景接近的Cy5熒光值，Cy5/Cy3的比值在0.09和之間，表明這4個(gè)樣品的DNA僅僅與檢測(cè)子677CC相匹配，因此判斷它們?cè)贑677T位點(diǎn)為純合野生型。樣品5顯示了“紅色”的熒光，Cy5/Cy3的比值是11.59，因此可以判斷這個(gè)樣品在C677T位點(diǎn)為純合變異型。樣品6分別得到了較強(qiáng)的Cy3和Cy5熒光信號(hào)，Cy5/Cy3的比值是1.05，因此可以判斷這個(gè)樣品在C677T位點(diǎn)為雜合型。我們對(duì)上述6個(gè)樣品進(jìn)行了測(cè)序驗(yàn)證（附圖E），測(cè)序結(jié)果和芯片結(jié)果相一致。

雙色熒光雜交微陣列的高通量應(yīng)用

我們利用雙色雜交微陣列芯片技術(shù)對(duì)127例惡性血液病患者和157例健康對(duì)照的MTHFR基因的C677T位點(diǎn)進(jìn)行了分析。兩組樣本分別點(diǎn)制了4個(gè)微陣列，每個(gè)微陣列中同一樣本重復(fù)3個(gè)點(diǎn)，病例組點(diǎn)制的微陣列大小為18×22，其中第22行僅有1個(gè)樣本，對(duì)照組點(diǎn)制的微陣列大小為21×23，第23行有3個(gè)樣本。所有樣本PCR產(chǎn)物的點(diǎn)樣濃度控制在200-300 ng/μl之間。根據(jù)Cy3和Cy5雙色熒光掃描結(jié)果疊加圖所呈現(xiàn)的綠、紅、黃3種顏色進(jìn)行分型。同一樣本在同一微陣列中有很好的重復(fù)性，在不同微陣列中熒光強(qiáng)度略有差別，但疊加圖顏色一致，分型結(jié)果一致。兩組基因型頻率均符合Hardy- Wenberg平衡，樣本具有群體代表性。病例組的C和T基因頻率為58.7%和41.3%，對(duì)照組的C和T基因頻率為66.9%和33.1%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=4.077， P=0.043）。我們對(duì)兩組的MTHFR C677T基因型及惡性血液病的易感性進(jìn)行了單因素分析，677CC、677CT和677TT在患者組和對(duì)照組分別為48例（37.8%）、53例(41.7%)、26例(20.5%)和72例（45.9%）、66例(42.0%)、19例(12.1%)。發(fā)現(xiàn)677CT和677TT基因型相對(duì)677CC基因型發(fā)生惡性血液病的風(fēng)險(xiǎn)度有增加趨勢(shì)，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（分別為OR=1.23，95%CI=0.74-2.05，P=0.434和OR=1.97，95%CI=0.98-3.97，P=0.057）。進(jìn)而我們將患者組4種疾?。–ML因例數(shù)過少除外）分別與對(duì)照組進(jìn)行了單因素分析，發(fā)現(xiàn)677TT基因型發(fā)生MM的風(fēng)險(xiǎn)明顯增加（OR=4.21，95%CI=1.50-11.83，P=0.006）。677CT和677TT基因型的NHL易感程度有增加的趨勢(shì)，且677TT較677CT增加明顯，呈等位基因計(jì)量- 效應(yīng)關(guān)系（表1，表2）。相反，677TT基因型的ALL易感程度有下降趨勢(shì)。Table 1. Correlation between MTHFR C667T and risk of MM and NHL

（略）Table 2. Correlation between MTHFR C667T and risk of ALL and AML（略）

討論

近年來SNP芯片檢測(cè)備受關(guān)注。目前芯片的制作主要有兩種方法，一種是將探針固定于芯片，將PCR擴(kuò)增并標(biāo)記的待檢測(cè)目的DNA混合物與探針雜交，這種方法可以檢測(cè)有限樣本的多個(gè)SNP位點(diǎn)；另一種方法是將PCR擴(kuò)增后的待檢測(cè)目的DNA固定于芯片，以標(biāo)記的探針進(jìn)行雜交，這種方法可以檢測(cè)多個(gè)樣本的有限SNP位點(diǎn)。Flavell等［2］研制了基于后一種方法的SNP檢測(cè)芯片，但該方法昂貴的鏈霉抗生物素蛋白（streptavidin）修飾的玻片只能在PBS中保存3天。我們介紹的雙色熒光雜交微陣列方法在等位基因的區(qū)分上過程簡(jiǎn)單、自動(dòng)化程度高，大樣本檢測(cè)時(shí)成本相對(duì)低，能在一個(gè)實(shí)驗(yàn)中分析上千個(gè)樣品，因此節(jié)省了時(shí)間和增強(qiáng)了效率。測(cè)序法證明，含有13個(gè)堿基的熒光標(biāo)記檢測(cè)子在37℃的雜交溫度下能夠精確地進(jìn)行基因分型。而且該芯片能夠較長時(shí)間地儲(chǔ)存，實(shí)驗(yàn)中能夠使用較多的微陣列，因此它能對(duì)結(jié)果的分析提供一個(gè)較好的統(tǒng)計(jì)基礎(chǔ)。葉酸缺乏和(或)葉酸代謝異?？蓪?dǎo)致多種腫瘤的發(fā)生，這與葉酸的兩種主要作用有關(guān)：①提供甲基使dUMP轉(zhuǎn)變?yōu)閐TMP，參與DNA的合成；②作為甲基供體維持基因組甲基化的獨(dú)特模式。MTHFR通過影響葉酸代謝而與腫瘤易感相關(guān)。無論何種基因型導(dǎo)致何種疾病易感，增加葉酸攝入似乎都可以降低發(fā)病的危險(xiǎn)性。但許多疾病的發(fā)生與父母甚至祖父母的葉酸缺乏有關(guān)，提高個(gè)體葉酸水平從而達(dá)到預(yù)防疾病的目的似乎也需要長期的過程；且由于基因型的不同，個(gè)體對(duì)葉酸的需求量有差異。因此鑒別遺傳易感個(gè)體進(jìn)行目標(biāo)明確的預(yù)防十分重要。患者組和對(duì)照組677C和677T基因頻率的顯著性差異提示C677T多態(tài)改變影響惡性血液病的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。具體疾病分析提示，該位點(diǎn)變異在各種惡性血液病的易感性及易感程度上不完全相同。Gonzalez-Ordonez等［3］發(fā)現(xiàn)，MM患者組的677CC基因型明顯少于對(duì)照組（分別為19%和46%；P=0.001），其中15例IgG型MM中僅有1例為677CC，677CC可以使MM發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)下降75%，Gonzalez-Fraile等［4］的研究數(shù)據(jù)也顯示MTHFR 677CC在MM患者組和對(duì)照組中的分布頻率明顯不同（分別為34.4%和48.1%），這與我們的研究結(jié)果一致。雖然我們的樣本數(shù)較少，但677TT基因型比例在兩組中差異顯著，難以完全用抽樣誤差解釋。多數(shù)研究認(rèn)為677CT/TT對(duì)ALL有保護(hù)作用，但最近一項(xiàng)在意大利人群中的研究顯示C677T與ALL發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)無關(guān)，認(rèn)為這可能是該地區(qū)人群的677T基因頻率過高以及高葉酸攝入水平造成的［5］。我們的研究也得出C677T與ALL發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)無關(guān)（P>0.05），在我們的對(duì)照組中677T基因頻率為33.1%，與上海地區(qū)人群的基因頻率相似［6］，明顯低于中國北方人群［7］以及上述意大利人群，這不足以解釋該結(jié)果。同時(shí)我們的數(shù)據(jù)顯示677TT的ALL發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)有下降趨勢(shì)（OR=0.38； 95%CI=0.39-4.8），與大多數(shù)的研究結(jié)論一致，但獲得能反映真實(shí)情況的結(jié)果可能還需要擴(kuò)大樣本含量。C677T與AML發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)無關(guān)，這與目前所有AML的研究結(jié)果一致。NHL發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)與C677T沒有明顯相關(guān)，這符合高加索人種間的研究結(jié)果［8］；但降低的酶活性似乎使患病趨勢(shì)增加，這與Skibola等［9］報(bào)道的677TT基因型的個(gè)體發(fā)生濾泡淋巴瘤的相對(duì)風(fēng)險(xiǎn)度升高存在一致性。相反，對(duì)日本人群的研究結(jié)果卻發(fā)現(xiàn)677T發(fā)生NHL的風(fēng)險(xiǎn)下降［10］。不盡相同的研究結(jié)果說明MTHFR C677T與疾病易感性關(guān)系可能因地區(qū)人群的基因頻率而異，因生活習(xí)慣而異，或者還受某些相關(guān)基因多態(tài)的影響（如MTHFR A1298C；蛋氨酸合酶 A2756G；亞甲基四氫葉酸脫氫酶 G1958A）。因此要取得反應(yīng)真實(shí)情況的研究結(jié)果可能需要更大的樣本含量，精確的疾病分型，合理的對(duì)照，多因素的分析。我們將在MTHFR SNP與惡性血液病遺傳易感性的后續(xù)研究中加以完善，而雙色熒光雜交微陣列方法將為我們的研究提供高通量平臺(tái)。

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[關(guān)鍵詞] 臨床；尿常規(guī)；傳統(tǒng)手工方法；干化學(xué)分析儀

[中圖分類號(hào)] R446.12 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1674-4721（2013）11（b）-0106-02

Comparative analysis of traditional manual method and dry chemistry analyzer in routine urine test

YANG Wen-na

Department of Teaching and Research of Clinical Laboratory，Medical College of Shaoguan College，Shaoguan 512026，China

[Abstract] Objective To investigate the application of traditional manual method and dry chemistry analyzer in routine urine test. Methods 200 specimens of early morning urine，collected from outpatient and inpatient patients in affiliated hospital，were selected and analyzed by traditional manual method and dry chemistry analyzer for routine urine test.The advantages and disadvantages of the two motheds were compared. Results Compared with traditional manual method，the differences of the positive rate of white blood cells，red blood cells and urine protein detected with dry chemistry analyzer were no statistically significant（P>0.05）.The coincidence rate of urine protein，red blood cells and white blood cells was respectively 98.5%，97.5% and 96.5% respectively. Conclusion In clinical routine urine test，both dry chemistry analyzer and traditional manual method have certain advantages and limitations，it should be combined in the application so as to improve the positive diagnosis rate.

[Key words] Clinic；Routine urine test；Traditional manual method；Dry chemistry analyzer

近年來，隨著醫(yī)療科技取得了迅猛發(fā)展，臨床檢驗(yàn)技術(shù)研究也得到了不斷的深入和完善，加之公眾維權(quán)及健康意識(shí)的增強(qiáng)，人們對(duì)臨床檢測(cè)水平有了更高的要求。在尿液檢測(cè)中，尿常規(guī)為重要且常見的檢測(cè)項(xiàng)目之一，如何及時(shí)、準(zhǔn)確、快速、靈敏地獲取檢驗(yàn)結(jié)果，是為臨床診治提供可靠參考依據(jù)的關(guān)鍵，因此，選取一種合適的檢測(cè)方法是臨床研究的重點(diǎn)[1-2]。本次研究共選取行尿常規(guī)檢驗(yàn)的晨尿200份，均為本院附屬醫(yī)院2012年2月～2013年2月收集的門診和住院患者標(biāo)本，同時(shí)采用傳統(tǒng)手工方法與干化學(xué)分析儀法檢測(cè)，并對(duì)兩種檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行了比較，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本次研究所用晨尿來源于本院附屬醫(yī)院門診和住院患者200例，其中，男146例，女54例；年齡9～82歲。所用材料包括10 ml尖底離心管、尿液干化試紙條、冰醋酸、顯微鏡、酒精燈、離心機(jī)。

1.2 檢測(cè)方法

嚴(yán)格按照說明書，對(duì)收集的尿液先采用干化學(xué)分析儀檢測(cè)，對(duì)白細(xì)胞、紅細(xì)胞、尿蛋白結(jié)果準(zhǔn)確記錄，然后采用傳統(tǒng)手工鏡檢方法，如應(yīng)用熱醋酸堿法檢測(cè)尿蛋白；白細(xì)胞和紅細(xì)胞的檢測(cè)方法為，取混勻后的尿液標(biāo)本10 ml放置于10 ml尖底離心管中，離心5 min，傾去上清液，保留0.2 ml沉渣，于鏡檢片上涂抹，對(duì)白細(xì)胞與紅細(xì)胞結(jié)果加以記錄。注意檢查中尿液沉渣留置時(shí)間在1 h內(nèi)，以防影響檢測(cè)結(jié)果。

1.3 檢測(cè)觀察指標(biāo)

對(duì)兩組患者尿樣進(jìn)行不同方法的臨床尿常規(guī)檢驗(yàn)后，記錄檢驗(yàn)結(jié)果中尿蛋白、紅細(xì)胞、白細(xì)胞檢出陽性及陰性情況，并對(duì)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。陽性率=陽性例數(shù)/總例數(shù)×100.00%；符合率=（陽性符合例數(shù)+陰性符合例數(shù)）/總例數(shù)×100.00%。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件，計(jì)量資料以x±s表示，采用t檢驗(yàn)，以P

2 結(jié)果

干化學(xué)分析儀檢測(cè)的白細(xì)胞、紅細(xì)胞及尿蛋白陽性率與傳統(tǒng)手工方法比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）（表1）。兩種檢測(cè)方法的尿蛋白符合率為98.5%，紅細(xì)胞符合率為97.5%，白細(xì)胞符合率為96.5%（表2）。

3 討論

隨著經(jīng)濟(jì)發(fā)展水平的增強(qiáng)，現(xiàn)代臨床實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)技術(shù)的不斷更新，質(zhì)量管理逐漸強(qiáng)化，如何使實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)更加規(guī)范化、標(biāo)準(zhǔn)化，已成為相關(guān)部門重視的主要問題。尿常規(guī)檢驗(yàn)中，尿液干化學(xué)分析儀作為新的檢測(cè)方案，是在傳統(tǒng)測(cè)定方法的基礎(chǔ)上發(fā)展而來，使臨床工作效率明顯提高，但在尿液紅細(xì)胞的檢驗(yàn)中，顯微鏡檢查仍為參考標(biāo)準(zhǔn)，因其可觀察紅細(xì)胞形態(tài)變化，并對(duì)數(shù)目行定量分析，而干化學(xué)分析儀尚無法完成上述操作，因此，干化學(xué)分析儀能否完全取代傳統(tǒng)的檢驗(yàn)方法，需進(jìn)一步研究探討[3-4]。

就檢測(cè)原理而言，尿液干化學(xué)分析儀檢測(cè)與傳統(tǒng)鏡檢存在差異，前者應(yīng)用化學(xué)法檢測(cè)原理，后者為物理檢測(cè)法，故尿液干化學(xué)分析儀的檢測(cè)數(shù)據(jù)在反映患者的病情時(shí)，存在一定的錯(cuò)誤性和片面性。實(shí)踐表明，傳統(tǒng)方法與干化學(xué)分析儀檢測(cè)聯(lián)用，具有可行性及必要性，可顯著提高泌尿系統(tǒng)患者早期疾病的診斷率[5-6]。依據(jù)美國臨床檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)委員會(huì)制訂的相關(guān)規(guī)定，需行鏡檢的情況包括以下幾方面：①臨床醫(yī)生提出鏡檢要求；②依據(jù)患者病情、疾病類型或其他檢查結(jié)果，需實(shí)施鏡檢輔助診斷；③尿液任一項(xiàng)化學(xué)檢查、物理檢查結(jié)果異常者。

尿沉渣鏡檢法的優(yōu)勢(shì)：此檢查方法完全在顯微鏡下進(jìn)行，使結(jié)果更為真實(shí)且直觀地表達(dá)，細(xì)胞等有形成分可直接呈現(xiàn)，為將細(xì)胞等有形成分通過顯微鏡的放大作用直接在鏡下真實(shí)呈現(xiàn)的方法，可真實(shí)反映紅細(xì)胞形態(tài)和數(shù)目，而只有在顯微鏡下，才可完成對(duì)這些病理情況的確定和鑒別，故不管尿干化學(xué)分析儀有多先進(jìn)，均無法取代尿沉渣顯微鏡檢查方案。但尿沉渣鏡檢法也有一定的局限性，如檢測(cè)效率較低，有較多的影響及干擾因素，在大量健康人群中不適合應(yīng)用等[7-8]。

干化學(xué)分析儀的優(yōu)勢(shì)：檢測(cè)所需要收集的尿量較少，可迅速呈現(xiàn)結(jié)果；報(bào)告方式為半定量模式，在臨床較多疾病的治療前后對(duì)比中具有較高的參考價(jià)值；因測(cè)試有一定的程序化及標(biāo)準(zhǔn)，故能最大程度地提高工作效率，并避免了目測(cè)誤差事件的發(fā)生。但干化學(xué)法也存在一定的局限性，因其為化學(xué)定性的過篩方法，對(duì)尿中的球蛋白、淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞等有臨床意義的成分指標(biāo)無法檢出；另外，多種因素均可對(duì)干化學(xué)分析法造成干擾，如菌尿、肌紅蛋白可有假陽性出現(xiàn)，維生素C可有假陰性出現(xiàn)，從尿化學(xué)試驗(yàn)陽性鏡檢中也存在一定異常情況。

本研究結(jié)果顯示，尿蛋白、白細(xì)胞、紅細(xì)胞采用傳統(tǒng)手工檢測(cè)方法和干化學(xué)分析儀檢測(cè)，均有一定的差異存在，但聯(lián)合兩種方法共同應(yīng)用，可產(chǎn)生協(xié)同效果，起到互補(bǔ)的作用，故需重視手工鏡檢的臨床價(jià)值。在臨床實(shí)際工作中，要理解傳統(tǒng)手工檢測(cè)方法與干化學(xué)分析儀的局限性及優(yōu)勢(shì)，使兩者相互補(bǔ)充，以獲取準(zhǔn)確的結(jié)果，提高陽性檢出率，為臨床診治提供參考[9-10]。

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【關(guān)鍵詞】 顯微鏡檢查； 干化學(xué)分析法； 紅細(xì)胞； 尿檢； 比較

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2013.05.071

在臨床檢驗(yàn)項(xiàng)目中，血尿檢驗(yàn)非常普遍，它是對(duì)泌尿系統(tǒng)疾病進(jìn)行診斷的一種重要方式，正確的檢驗(yàn)結(jié)果，能夠準(zhǔn)確地反映患者泌尿系統(tǒng)的疾病的狀況[1]。但在實(shí)驗(yàn)過程中，不合格標(biāo)本對(duì)整個(gè)檢測(cè)的結(jié)果影響比較大，這就必須對(duì)標(biāo)本的采集進(jìn)行嚴(yán)格的控制，促使其質(zhì)量的良好和有效性[2]，而對(duì)檢測(cè)方法的選擇，似乎顯得尤為重要，到底哪種方法是檢測(cè)尿液紅細(xì)胞的最佳選擇，為了對(duì)這4種檢測(cè)法更了解，本院于2010年6月-2012年6月將門診及住院部收治過的進(jìn)行過尿液檢查的400例患者進(jìn)行了一次研究性分析，取得了滿意的效果，現(xiàn)具體報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 取本院門診及住院部2010年6月-2012年6月收治過的進(jìn)行過尿檢的患者400例，男218例，女182例，年齡21～73歲，平均（47±2.1）歲。選取400例患者的中段尿液，每一份標(biāo)本為30 ml，分為3份，每份10 ml，其中一份采用尿沉渣鏡檢，一份采用uf-500I的尿沉渣分析儀方法，另一份則采用干化學(xué)法進(jìn)行檢測(cè)，對(duì)3份檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行觀察，并對(duì)比。

1.2 試劑與儀器 尿沉渣分析儀器、配套試劑和試紙、干化學(xué)分析儀器以及顯微鏡。

1.3 檢測(cè)方法 根據(jù)操作說明書進(jìn)行檢測(cè)，并根據(jù)臨床檢驗(yàn)的操作規(guī)范來進(jìn)行尿沉渣鏡檢。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 本次實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 16.0的軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理和分析，計(jì)量資料用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料用 字2檢驗(yàn)，以P

2 結(jié)果

采用尿沉渣法進(jìn)行檢測(cè)的尿液，其陽性率為9.25%，采用干化學(xué)法進(jìn)行檢測(cè)的尿液，其陽性率為11.50%，采用UF-500i尿沉渣分析儀進(jìn)行檢測(cè)的尿液，其陽性率為10.75%，三種方法陽性率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；對(duì)于尿沉渣鏡檢為陰性，而干化學(xué)法檢測(cè)為陽性的11例尿液樣本，采用膠體金單克隆的抗體隱血法進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果為7例陽性，4例陰性，假陽性率為36.36%。見表1。

3 討論

從本次研究結(jié)果來看，對(duì)于尿紅細(xì)胞的檢測(cè)結(jié)果會(huì)因?yàn)闄z測(cè)方法的不同而產(chǎn)生一些差異，而四種檢測(cè)方法間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。從檢測(cè)結(jié)果來看，4種檢測(cè)方法中并沒有哪種方法可被例入最佳選擇范圍。采用尿沉渣法是對(duì)尿紅細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè)后的主要參考標(biāo)準(zhǔn)，但是該方法不無法將溶解的紅細(xì)胞檢測(cè)出來；干化學(xué)法能夠?qū)⒛蛞旱腍b檢測(cè)出來，并以能夠?qū)⒓t細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)，對(duì)溶血性病癥的診斷非常有利，但該方法受影響的因素較多，可以將該方法作為對(duì)尿紅細(xì)胞進(jìn)行篩選的方法使用；膠體金單克隆的抗體隱血法具有較強(qiáng)的敏感性與特異性，對(duì)于鑒別與診斷來說，具有相當(dāng)重要的價(jià)值，但該方法比較敏感，對(duì)于常規(guī)檢查并不適用；UF-500i尿沉渣分析儀則主要用于測(cè)試尿液中的RBC[3]。在本研究中，采用尿沉渣鏡檢方法以及干化學(xué)法進(jìn)行檢測(cè)，存在著一些差異，其中，采用干化學(xué)法對(duì)尿紅細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè)，主要是因?yàn)槟蛞褐写嬖诘难t蛋白或者游離血紅蛋白中含有亞鐵血紅素，這種血紅素具有過氧化物酶的活性，其可以對(duì)過氧化物進(jìn)行催化，并將一些新生態(tài)氧釋放出來，從而將本來沒有顏色的鄰甲苯胺轉(zhuǎn)化為藍(lán)色，從藍(lán)色深淺可以判斷紅細(xì)胞或者血紅蛋白含量，顏色越深，其量越多[4]。采用干化學(xué)法，不僅能對(duì)完整紅細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè)，已經(jīng)被破壞的紅細(xì)胞也能被檢測(cè)出來[5]。

尿液檢測(cè)至今仍是醫(yī)學(xué)界最為主要的臨床檢測(cè)方法，也是尿液分析工作的主體。而臨床檢測(cè)工作所得的數(shù)據(jù)則是病癥診斷的一個(gè)重要依據(jù)，因此，如何更好地提高尿液分析的精度，為診斷工作取得更高精度的數(shù)據(jù)依托，已經(jīng)成為了我國醫(yī)學(xué)事業(yè)發(fā)展歷程中的一個(gè)重點(diǎn)。診斷工作是確定醫(yī)療方向的一個(gè)指向標(biāo)，只有在診斷確切的前提下，醫(yī)療工作才能夠起到相應(yīng)的實(shí)效。尤其是在近年來，大型醫(yī)療的事故頻發(fā)，很大程度上都是因?yàn)樵\斷的失準(zhǔn)而造成的。為此，在進(jìn)行尿標(biāo)本的留取時(shí)，可以對(duì)2次晨尿進(jìn)行留取[6]，通過二次晨尿標(biāo)本的留取，對(duì)紅細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè)，泌尿系統(tǒng)疾病的重要性質(zhì)就能夠得到有效的反映，同時(shí)，在這種情況下，能夠有效檢測(cè)出部分項(xiàng)目的陽性率。成功采集標(biāo)本后，要將標(biāo)識(shí)貼在容器外壁上，在檢驗(yàn)申請(qǐng)單上，將采集日期和時(shí)間詳細(xì)的標(biāo)注在申請(qǐng)表上。

因此，總的來說，現(xiàn)在還沒有一種檢測(cè)尿紅細(xì)胞的完美方法，由于檢測(cè)原理不一樣，并受到各種因素的影響，會(huì)使檢測(cè)結(jié)果呈現(xiàn)出一定差異，但是在實(shí)際應(yīng)用中，需根據(jù)實(shí)際情況和需求，選用多種方式聯(lián)合檢測(cè)，可提高檢測(cè)準(zhǔn)確性。建議尿儀器分析法出現(xiàn)尿紅細(xì)胞全部是陰性時(shí)， 可以不做鏡檢； 尿儀器分析法一項(xiàng)是陽性時(shí)， 必須鏡檢， 以防出現(xiàn)假陽性，可提高尿紅細(xì)胞有效檢出率。

綜上所述，可以得出以下結(jié)論，4種對(duì)尿液紅細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè)的方法之間無可比性，它們都具有各自的優(yōu)勢(shì)和劣勢(shì)，應(yīng)結(jié)合實(shí)際情況進(jìn)行選擇，如情況允許，可以將它們聯(lián)合起來使用，能夠取得更好的結(jié)果，而對(duì)于尿沉渣鏡檢為陰性而干化學(xué)法檢測(cè)為陽性的樣本，應(yīng)再次采用膠體金單克隆的方法進(jìn)行驗(yàn)證。

參考文獻(xiàn)

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[2] 顧可梁.尿液檢驗(yàn)問題解答[J].臨床檢驗(yàn)雜志，1999，17（2）：126.

[3] 蔡玉英.尿紅細(xì)胞計(jì)數(shù)和形態(tài)在血尿鑒別診斷中的應(yīng)用[J].實(shí)用醫(yī)技雜志，2010，17（10）：936.

[4] 劉藝軍.尿液標(biāo)本中紅細(xì)胞定量檢測(cè)方法的比較[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2011，8（7）：20.

[5] 羅海霞.干化學(xué)法聯(lián)合沉渣鏡檢檢測(cè)尿液紅細(xì)胞和白細(xì)胞的比對(duì)研究[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2011，8（8）：30.

篇6

【關(guān)鍵詞】醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)；臨床；質(zhì)量控制；策略

【文章編號(hào)】1004-7484（2014）05-3399-01

1引言

隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，許多的自動(dòng)化分析儀器廣泛地應(yīng)用于臨床醫(yī)學(xué)的檢驗(yàn)環(huán)節(jié)中，醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)的自動(dòng)化程度越來越高，檢驗(yàn)方法更加規(guī)范化和標(biāo)準(zhǔn)化。計(jì)算機(jī)技術(shù)的應(yīng)用和普及大大提高了醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)的準(zhǔn)確性，并提高了檢驗(yàn)工作的效率。近幾年來臨床醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)的精密程度越來越高，從而導(dǎo)致檢驗(yàn)分析中的誤差不再是影響檢驗(yàn)環(huán)節(jié)的最主要因素，醫(yī)學(xué)檢測(cè)中的質(zhì)量控制成為限制臨床醫(yī)學(xué)水平進(jìn)一步提高的重要因素。

2臨床醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)環(huán)節(jié)的質(zhì)量控制策略

2.1科學(xué)合理地選擇檢驗(yàn)項(xiàng)目

檢驗(yàn)項(xiàng)目的選擇是做好臨床醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)工作的重要前提。檢驗(yàn)項(xiàng)目的選擇應(yīng)該兼顧安全性、科學(xué)合理性、較強(qiáng)的針對(duì)性、時(shí)效性和經(jīng)濟(jì)性等多項(xiàng)要求，以為后續(xù)的工作做好鋪墊。目前醫(yī)學(xué)檢測(cè)的方法有很多種，加之各種先進(jìn)的儀器的應(yīng)用和普及，不同疾病的檢測(cè)方法不同，且同一種疾病的檢測(cè)方法也有很多種，這就要求臨床檢測(cè)的醫(yī)生能夠掌握最新的檢測(cè)方法和先進(jìn)的技術(shù)手段，并能根據(jù)患者的實(shí)際情況科學(xué)合理地選擇檢查項(xiàng)目和檢驗(yàn)方法，能夠以最有效的方法解決問題，在保證診斷正確性的基礎(chǔ)上盡量選擇步驟簡(jiǎn)單、經(jīng)濟(jì)實(shí)惠的檢測(cè)項(xiàng)目，真正使患者受利，這也是提高檢驗(yàn)結(jié)果可靠性的關(guān)鍵性步驟。所以，作為檢驗(yàn)科的工作醫(yī)生以及護(hù)士，要保持與臨床科室醫(yī)生的溝通，以掌握最新的檢測(cè)技術(shù)和檢測(cè)方法，在臨床醫(yī)師核對(duì)檢驗(yàn)項(xiàng)目清單簽名后再對(duì)患者進(jìn)行檢查。出現(xiàn)臨床需求但是技術(shù)條件不允許的情況時(shí)要及時(shí)通知臨床的主治醫(yī)生，進(jìn)行檢查項(xiàng)目的協(xié)調(diào)。與臨床主治醫(yī)生進(jìn)行溝通時(shí)要多向其推薦最新的檢查項(xiàng)目以及臨床意義，合理地開展新儀器新設(shè)備的應(yīng)用，提高資源的利用率。

2.2發(fā)揮臨床醫(yī)護(hù)人員的作用

隨著臨床醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)被列入醫(yī)院管理評(píng)價(jià)體系的重要內(nèi)容，臨床醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)過程中的質(zhì)量控制變得極為重要起來。醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)的質(zhì)量控制環(huán)節(jié)不僅包括實(shí)驗(yàn)室本身的質(zhì)量控制，臨床所提供的標(biāo)本是做好后續(xù)檢測(cè)工作的重要前提。這就要求臨床的相關(guān)護(hù)理人員要有過硬的專業(yè)知識(shí)和高度的責(zé)任感。臨床醫(yī)生是患者病情的直接診斷和治療負(fù)責(zé)人，從檢查項(xiàng)目的選擇到檢查結(jié)果的評(píng)定都是由臨床醫(yī)生負(fù)責(zé)，可見，臨床的醫(yī)護(hù)工作人員在整個(gè)醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)的質(zhì)量控制中是極為關(guān)鍵的一個(gè)因素。作為臨床醫(yī)生或醫(yī)護(hù)人員要在掌握患者病情和各檢驗(yàn)項(xiàng)目的基礎(chǔ)上選擇合理的檢測(cè)項(xiàng)目，只有這樣才能保證檢驗(yàn)結(jié)果的有效性。

2.3與患者加強(qiáng)溝通

加強(qiáng)與患者的溝通主要是指在檢測(cè)方案和檢測(cè)項(xiàng)目確定之前，一定要結(jié)合患者的實(shí)際情況進(jìn)行標(biāo)本的采集。首先，醫(yī)護(hù)人員應(yīng)該了解患者的生活起居和飲食習(xí)慣，通過這些生活習(xí)慣觀察患者生理和心理的變化情況，哪些是對(duì)患者的病情好轉(zhuǎn)有利的，哪些是無利的，從而引導(dǎo)患者養(yǎng)成良好的生活習(xí)慣。在此過程中，密切關(guān)注影響檢測(cè)方案和檢測(cè)結(jié)果的一切可能因素，加強(qiáng)與患者的交流，消除他們的抵觸情緒，在項(xiàng)目檢測(cè)之前和患者建立起信任的橋梁，爭(zhēng)取他們的合作，并使其保持愉悅的心情，這些都有利于病情的好轉(zhuǎn)。對(duì)于影響檢測(cè)結(jié)果的可能原因主要包括一些固定的因素如年齡、性別和民族等，以及一些不固定的因素如飲食的變化和飲食的多少等。對(duì)于固定的因素?zé)o法改變，醫(yī)護(hù)人員要根據(jù)專業(yè)知識(shí)和以往的工作經(jīng)驗(yàn)為患者選擇最為合適的監(jiān)測(cè)方案和檢測(cè)項(xiàng)目。對(duì)于不固定的一些因素，醫(yī)護(hù)人員要對(duì)患者起到引導(dǎo)和監(jiān)督作用，積極的改善患者的飲食結(jié)構(gòu)和飲食習(xí)慣，根據(jù)所要檢測(cè)的項(xiàng)目來制定患者的飲食表，保證檢測(cè)結(jié)果的高效性。

2.4標(biāo)本采集的質(zhì)量控制

標(biāo)本的采集是整個(gè)臨床醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中的最為重要的環(huán)節(jié)，該環(huán)節(jié)的質(zhì)量出現(xiàn)問題，前邊的所有工作都會(huì)前功盡棄。因此，必須要重視標(biāo)本采集環(huán)節(jié)中的質(zhì)量控制。要想做好標(biāo)本采集的質(zhì)量控制，就必須做好以下幾點(diǎn)：

2.4.1把握最佳的采樣時(shí)間。只有在合適的時(shí)間進(jìn)行采樣才能有效地避免各種其他因素的干擾。采樣的最佳時(shí)間即代表性最強(qiáng)的時(shí)間和陽性率檢出的最高時(shí)間段，總體來說就是保證檢查結(jié)果有效的時(shí)間。這不僅需要過硬的專業(yè)知識(shí)，還需要豐富的臨床經(jīng)驗(yàn)，要將一般經(jīng)驗(yàn)和患者的實(shí)際情況結(jié)合起來確定采樣的最佳時(shí)間。

2.4.2采血過程中的技術(shù)操作。采集標(biāo)本大多數(shù)是血樣的采集。在采血的過程中，首先要注意采血的選取，通過靜脈采血時(shí)要讓患者坐在高度適中的座位上，止血帶的使用時(shí)間最好不要超過1分鐘，穿刺成功之后應(yīng)該立即松開止血帶。在采血完畢后對(duì)收集的要求抗凝的血液樣品要進(jìn)行抗凝顛倒，以防出現(xiàn)血凝塊。

2.5標(biāo)本的傳送以及驗(yàn)收處理

標(biāo)本采集之后就是標(biāo)本的傳送以及驗(yàn)收。此過程中的質(zhì)量控制也是必不可少的。有些標(biāo)本需要一些特殊的條件來保存，例如對(duì)溫度和光照的要求等，因此，在標(biāo)本進(jìn)行傳送的過程中一定要為標(biāo)本提供適宜的溫度環(huán)境，防止出現(xiàn)變性，影響檢查結(jié)果。另外，除了在保證標(biāo)本的適宜條件，在傳送的過程中還要注意保證標(biāo)本的安全，防止污染。對(duì)于懷疑的高危險(xiǎn)性標(biāo)本要嚴(yán)密包裝，嚴(yán)防感染他人。檢驗(yàn)科的相關(guān)工作人員應(yīng)該對(duì)收到的標(biāo)本及時(shí)核對(duì)及時(shí)進(jìn)行檢查分析，對(duì)不能立即檢查的樣本要置于適宜條件下保存。對(duì)于檢查過程中出現(xiàn)的不合格標(biāo)本要首先進(jìn)行記錄，然后與臨床醫(yī)生取得聯(lián)系，共同找出原因。

3結(jié)語

綜上所述，臨床醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)的質(zhì)量控制主要是醫(yī)院要建立完善的質(zhì)量控制體系，醫(yī)護(hù)人員要重視質(zhì)量控制環(huán)節(jié)，加強(qiáng)責(zé)任意識(shí)。只有這樣，才能保證醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)的有效性和正確性。

作者：黃梅

參考文獻(xiàn)： 

篇7

僅關(guān)注某一個(gè)檢測(cè)項(xiàng)目，而忽略了疾病變化過程中所有檢測(cè)項(xiàng)目的變化。目前的教學(xué)中均以檢驗(yàn)項(xiàng)目的參考值、結(jié)果分析及臨床意義為重點(diǎn)，但許多疾病的某一檢測(cè)項(xiàng)目會(huì)有相同或相似的變化，而同一疾病的不同階段某一檢測(cè)項(xiàng)目也可能呈現(xiàn)不同的變化。所以，應(yīng)加強(qiáng)檢驗(yàn)項(xiàng)目與疾病關(guān)系的綜合分析。比如肝功能檢測(cè)一章，課本上往往對(duì)肝功能檢測(cè)3大方面（蛋白質(zhì)功能檢測(cè)、膽紅素代謝功能檢測(cè)、血清酶類檢測(cè)）進(jìn)行重點(diǎn)講解。在蛋白質(zhì)功能檢測(cè)一節(jié)，又分為白蛋白及總蛋白水平升高和降低以及球蛋白和總蛋白水平升高和降低等。那么，是否可以嘗試一種新的方法，按照內(nèi)科學(xué)中肝臟常見疾病依次講解，如急性重癥肝炎、慢性重癥肝炎、肝硬化、肝癌等疾病過程中，應(yīng)選擇哪些監(jiān)測(cè)指標(biāo)；在肝性昏迷的患者中需要監(jiān)測(cè)哪些指標(biāo)。根據(jù)疾病的需要詳細(xì)地進(jìn)行講解，使臨床醫(yī)學(xué)生更能明白針對(duì)這些患者應(yīng)該開什么樣的化驗(yàn)單，如何使用這些檢測(cè)項(xiàng)排除某些疾病等，從而加強(qiáng)臨床醫(yī)學(xué)生疾病綜合分析的能力。

2教學(xué)內(nèi)容脫離臨床

在臨床醫(yī)學(xué)生實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)教學(xué)中應(yīng)以“臨床應(yīng)用為導(dǎo)向，兼顧檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)”。

2．1應(yīng)向?qū)W生介紹實(shí)驗(yàn)方法學(xué)，了解每種檢測(cè)方法的靈敏度和特異度，根據(jù)不同需要合理選擇檢測(cè)方法。比如梅毒的血清學(xué)檢測(cè)，在臨床應(yīng)用中主要有3種方法：梅毒螺旋體特異性抗體檢測(cè)、非特異性快速梅毒過篩實(shí)驗(yàn)、梅毒螺旋體明膠凝集試驗(yàn)。那么，哪種試驗(yàn)適合作為初篩，哪種試驗(yàn)適合作為確診，哪種試驗(yàn)適合判斷療程等，應(yīng)結(jié)合實(shí)際病例進(jìn)行講解。目前臨床實(shí)驗(yàn)室已采用化學(xué)發(fā)光法進(jìn)行梅毒特異性抗體檢測(cè)，靈敏度和特異度均較以前的檢測(cè)方法高，且方便快捷，可更好地服務(wù)臨床，尤其是急診患者，但臨床醫(yī)生對(duì)此還不太了解。另外，梗阻性黃疸時(shí)，理論上尿膽紅素檢測(cè)為強(qiáng)陽性，尿膽原檢測(cè)為陰性。但因?yàn)槟蚰懺瓩z測(cè)過程中，當(dāng)尿膽紅素水平較高時(shí)，會(huì)干擾尿膽原的檢測(cè)，所以會(huì)導(dǎo)致梗阻性黃疸患者尿膽原假性輕度增高的現(xiàn)象。

2．2應(yīng)重視新技術(shù)、新項(xiàng)目的介紹。實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)教學(xué)嚴(yán)重滯后于檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)的發(fā)展。雖然新版教材已更新了教學(xué)內(nèi)容，涵蓋了許多臨床的新技術(shù)和新項(xiàng)目，但是目前實(shí)踐性教學(xué)內(nèi)容和教學(xué)安排仍偏重“四大常規(guī)”和血液骨髓學(xué)檢驗(yàn)等手工操作項(xiàng)目，遠(yuǎn)不能概括如流式細(xì)胞技術(shù)、基因芯片、自身免疫性疾病的實(shí)驗(yàn)診斷、藥物濃度監(jiān)測(cè)等許多已在臨床應(yīng)用的新技術(shù)和新項(xiàng)目。教學(xué)中甚至還包括已經(jīng)淘汰的檢測(cè)項(xiàng)目，如出血時(shí)間的測(cè)定、血塊收縮試驗(yàn)、毛細(xì)血管脆性試驗(yàn)等；而一些臨床上常用的新檢測(cè)方法卻未提及。另外，實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)的設(shè)施還停留在手工操作的水平，而臨床上檢驗(yàn)項(xiàng)目基本上由自動(dòng)化的儀器完成，兩者形成了巨大的反差。所以，應(yīng)加強(qiáng)新項(xiàng)目、新技術(shù)的介紹，這不僅為新項(xiàng)目的開展和普及打好思想基礎(chǔ)，也有助于臨床醫(yī)學(xué)生開闊視野，拓展思路，培養(yǎng)創(chuàng)新的意識(shí)和動(dòng)力。比如卵巢癌診斷過程中新的檢測(cè)項(xiàng)目人附睪蛋白4檢測(cè)，是最新發(fā)現(xiàn)的卵巢癌診斷標(biāo)志物，特異性和靈敏度均高，與現(xiàn)有腫瘤標(biāo)記物糖類抗原125結(jié)合更具有臨床價(jià)值。

篇8

【摘要】梅毒作為性傳播疾病的一種，其發(fā)病率近年來在我國呈明顯上升趨勢(shì)，對(duì)梅毒的早期診斷有利于指導(dǎo)臨床及時(shí)治療，對(duì)于控制梅毒的蔓延有重要意義。本文對(duì)目前臨床實(shí)驗(yàn)室常見的梅毒血清學(xué)檢測(cè)方法進(jìn)行簡(jiǎn)單的綜述，并對(duì)各種方法進(jìn)行比較，有利于實(shí)驗(yàn)室根據(jù)自身?xiàng)l件選擇相對(duì)性價(jià)比高的檢測(cè)方法，同時(shí)指導(dǎo)臨床醫(yī)師正確認(rèn)識(shí)梅毒的血清學(xué)檢測(cè)報(bào)告，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)梅毒的早期診斷，早期治療。

【關(guān)鍵詞】梅毒；血清學(xué)檢測(cè) ；梅毒螺旋體抗原；反應(yīng)素

目前臨床主要依賴血清學(xué)檢測(cè)結(jié)果來實(shí)現(xiàn)梅毒診斷的早、快、準(zhǔn)。梅毒的血清學(xué)檢測(cè)方法多種多樣，這方面以前曾有多篇文章報(bào)道過，但基本上是側(cè)重于就其中幾種檢測(cè)方法的實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行比較。本文擬就當(dāng)前梅毒常見的血清學(xué)檢測(cè)方法做一個(gè)較為通俗詳盡的闡述。

依據(jù)所用抗原的不同，梅毒的血清學(xué)檢測(cè)主要分為兩大類：

1 非梅毒螺旋體抗原試驗(yàn)

為非特異性抗體檢測(cè)試驗(yàn)。梅毒螺旋體一旦感染人體，宿主迅速對(duì)螺旋體表面的脂質(zhì)做出免疫應(yīng)答，在3~4周左右產(chǎn)生抗類脂抗原的抗體(反應(yīng)素)。這些抗體主要是IgG和IgM型混合抗體。反應(yīng)素對(duì)機(jī)體無保護(hù)作用。未經(jīng)治療的病人，其血清內(nèi)的反應(yīng)素可長期存在，經(jīng)適當(dāng)治療后可以逐漸減少至轉(zhuǎn)為陰性。非梅毒螺旋體抗原試驗(yàn)主要就是測(cè)定血清中的抗心磷脂抗體，故可用于療效觀察、判斷復(fù)發(fā)及再感染。但是感染梅毒后，心磷脂抗體出現(xiàn)晚于特異性螺旋體抗體，晚期梅毒時(shí)此類抗體又部分轉(zhuǎn)陰。因此非梅毒螺旋體抗原試驗(yàn)不適于診斷一、三期梅毒，潛伏期梅毒也不敏感。另外此類試驗(yàn)的特異性稍差，有生物學(xué)的假陽性反應(yīng)，如瘧疾、麻風(fēng)、傳染性單核細(xì)胞增多癥、回歸熱、鼠咬熱等疾病，都可能引起假陽性。目前多數(shù)醫(yī)院僅將其列為梅毒的常規(guī)篩查試驗(yàn)。

1.1 性病研究實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn)(VDRL)：是從牛心肌中提取的心擬脂，適量加入膽固醇及卵磷脂以提高敏感性，通常稱這種抗原為心擬脂抗原。VDRL試驗(yàn)屬于微量玻片法，可作定量及定性試驗(yàn)，需用顯微鏡讀取結(jié)果，是唯一推薦用于檢測(cè)腦脊液反應(yīng)素的試驗(yàn)，對(duì)診斷神經(jīng)梅毒具有重要價(jià)值。1.2 快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗(yàn)(RPR)：所用抗原為標(biāo)準(zhǔn)的牛心肌脂抗原，是VDRL抗原的改良，敏感性及特異性與VDRL相似，優(yōu)點(diǎn)是肉眼即可讀出結(jié)果。該方法操作簡(jiǎn)便、迅速，適用于大量標(biāo)本檢測(cè)，進(jìn)行梅毒的篩查。缺點(diǎn)是當(dāng)抗體含量過高時(shí)，易出現(xiàn)假陰性反應(yīng)，即前帶現(xiàn)象(prezone phenomenon)，導(dǎo)致漏檢，對(duì)潛伏期梅毒、神經(jīng)梅毒不敏感。1.3 不加熱血清反應(yīng)素玻片試驗(yàn)(USR)：所用抗原也是VDRL抗原的改良，敏感性及特異性與VDRL相似。血清不需加熱滅活，節(jié)省操作時(shí)間，但主觀性強(qiáng)，易出現(xiàn)漏檢。

1.4 甲苯胺紅不加熱血清反應(yīng)素試驗(yàn)(TRUST)：所用抗原是從牛心提取的心磷脂和從雞蛋黃提取的卵磷脂及膽固醇，試驗(yàn)結(jié)果清晰易讀，簡(jiǎn)便快速，穩(wěn)定性好，TRUST法比RPR、USR效價(jià)測(cè)定高一個(gè)滴度［1］，缺點(diǎn)是許多因素影響結(jié)果，如高脂血癥和抗心磷脂抗體陽性的血清均可干擾而出現(xiàn)假陽性結(jié)果［2］。

2 梅毒螺旋體(TP)抗原血清試驗(yàn)

采用梅毒螺旋體作抗原，是特異性的抗原抗體反應(yīng)。這種試驗(yàn)敏感性和特異性均高，一般用作確認(rèn)試驗(yàn),用以檢測(cè)血清中抗梅毒螺旋體IgG或IgM抗體，該抗體即使患者經(jīng)過足夠治療，仍能長期存在，甚至終身不消失，血清學(xué)反應(yīng)持續(xù)陽性，因此不能用于療效觀察。2.1 梅毒螺旋體血凝試驗(yàn)(TPHA)：利用間接血凝法測(cè)定人血清或血漿中的梅毒螺旋體的特異性抗體，只要有微量的抗體(血清通常用作1∶80以上稀釋)就可使致敏的紅細(xì)胞發(fā)生凝集作用。試劑制備過程排除了各種非特異性反應(yīng)，因此TPHA的敏感性和特異性較高，是目前國內(nèi)許多醫(yī)院常用的梅毒血清確認(rèn)試驗(yàn)。缺點(diǎn)是試劑成本較高，操作較繁瑣，且易發(fā)生自凝現(xiàn)象和生物學(xué)假陽性。

2.2 梅毒螺旋體明膠凝集試驗(yàn)(TPPA)：原理與TPHA基本相同。TPPA試驗(yàn)用梅毒螺旋體致敏的明膠顆粒替代TPHA試驗(yàn)中致敏的紅細(xì)胞，此致敏顆粒與人血清或血漿中的梅毒螺旋體抗體結(jié)合，產(chǎn)生可見的凝集反應(yīng)，具有較高的敏感性。有文獻(xiàn)報(bào)道［3］，TPPA的特異性為96.9%～99.8%，敏感性達(dá)90%以上。

2.3 梅毒快速檢測(cè)試紙條：是根據(jù)雙抗原夾心免疫層析原理，在硝酸纖維素膜上包被TP重組抗原，在玻璃纖維上吸附膠體金標(biāo)記TP重組抗原，樣品中的TP抗體首選與金標(biāo)抗原結(jié)合形成復(fù)合物，順膜滲透至包被反應(yīng)區(qū)，與包被TP抗原結(jié)合，形成由膠體金抗原-TP抗體-抗原組成的紫紅色反應(yīng)帶。本法簡(jiǎn)單，快速，特異性好。

2.4 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)：是近年來隨著梅毒螺旋體基因工程抗原的研制成功而建立的方法，同時(shí)利用酶的放大系統(tǒng)，提高了檢測(cè)的靈敏度，其測(cè)定梅毒螺旋體感染的特異性和靈敏度均在99%左右［4］。采用雙抗原夾心法，將梅毒特異性抗原包被在微孔板上，同時(shí)檢測(cè)梅毒螺旋體特異性IgM和IgG抗體，故可用于早期診斷。TP-ELISA方法操作簡(jiǎn)便，不受樣本中纖維蛋白和溶血等影響，一次可進(jìn)行批量樣本的檢測(cè)，用酶標(biāo)儀分析，客觀準(zhǔn)確，結(jié)果便于保留及標(biāo)準(zhǔn)化管理，可用作篩查和確認(rèn)試驗(yàn)。因此TP-ELISA方法被公認(rèn)為梅毒血清學(xué)診斷實(shí)驗(yàn)的首選方法。 其它諸如熒光密螺旋體抗體吸收試驗(yàn)，梅毒螺旋體制動(dòng)試驗(yàn)，梅毒螺旋體免疫印記試驗(yàn)，梅毒基因診斷技術(shù)等血清學(xué)檢測(cè)方法由于對(duì)實(shí)驗(yàn)室的要求比較高，檢測(cè)時(shí)間較長等因素，限制了他們?cè)卺t(yī)院的推廣應(yīng)用，在此就不一一贅述。

3 討 論

梅毒作為性傳播疾病(STD)的一種，其發(fā)病率近年來在我國呈明顯上升的趨勢(shì)，已成為十分重要的社會(huì)問題和醫(yī)學(xué)問題。選擇一種敏感性和特異性均高的檢測(cè)方法來及早、準(zhǔn)確地診斷梅毒尤為重要。而梅毒的血清學(xué)檢測(cè)方法多種多樣，不同的檢測(cè)方法其臨床意義又不盡相同。調(diào)查顯示多數(shù)臨床醫(yī)務(wù)人員甚至于部分檢驗(yàn)工作者對(duì)這方面都感到困惑。鑒于此，文章較為詳盡地闡述了當(dāng)前梅毒常見的血清學(xué)檢測(cè)方法，旨在幫助相關(guān)人員在熟悉各種檢測(cè)方法后，能夠根據(jù)自己的檢測(cè)需要和實(shí)驗(yàn)室的客觀條件選擇相對(duì)敏感、準(zhǔn)確、全面的檢測(cè)方法。

參 考 文 獻(xiàn)

［1］ 董雅榮,李桂娥,馬季,等.TRUST與USR、RPR在梅毒篩選試驗(yàn)中的對(duì)比觀察［J］.中國皮膚性病學(xué)雜志,1994,8(2):114-115.

［2］ 李鈺.兩種梅毒血清學(xué)試驗(yàn)的檢測(cè)結(jié)果比較［J］.廣西預(yù)防醫(yī)學(xué),2001,7(2):122.

［3］ 孫立平,陳勝明.兩種梅毒檢驗(yàn)方法的適用性分析［J］.中國輸血雜志,2002,15(4):247-248.

篇9

檢測(cè)及評(píng)價(jià)方法

采用丹麥Medtronic公司生產(chǎn)的Keypoint多功能神經(jīng)誘發(fā)電位儀，使用針極電極、表面電極、環(huán)狀電極、馬鞍橋電極等進(jìn)行檢測(cè)。在室溫環(huán)境下，刺激強(qiáng)度由小到大，達(dá)到超強(qiáng)刺激以保證待檢測(cè)神經(jīng)纖維完全興奮。在損傷組中，對(duì)雙側(cè)肢體的同名神經(jīng)分別進(jìn)行針極肌電圖檢測(cè)及神經(jīng)傳導(dǎo)檢測(cè)，檢測(cè)均在傷后6個(gè)月進(jìn)行，記錄傷側(cè)出現(xiàn)失神經(jīng)電位的例數(shù)以及傷側(cè)神經(jīng)傳導(dǎo)速度和動(dòng)作電位波幅比健側(cè)低10%以上的例數(shù)，計(jì)算假陰性率。在對(duì)照組中，取右側(cè)肢體作為檢測(cè)對(duì)象，記錄右側(cè)出現(xiàn)失神經(jīng)電位的例數(shù)以及右側(cè)神經(jīng)傳導(dǎo)速度和動(dòng)作電位波幅比左側(cè)低10%以上的例數(shù)，計(jì)算假陽性率。兩組分別對(duì)上、下肢進(jìn)行檢測(cè)。

統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

運(yùn)用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件，采用配對(duì)設(shè)計(jì)的χ2檢驗(yàn)對(duì)損傷組中兩種方法的檢出率進(jìn)行比較；對(duì)正常組中兩種方法的陰性率進(jìn)行比較。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

結(jié)果

1損傷組檢測(cè)結(jié)果

在94例上肢損傷者中，通過針極肌電圖檢測(cè)，89例出現(xiàn)失神經(jīng)電位，5例未出現(xiàn)，假陰性率為5.3%：通過神經(jīng)傳導(dǎo)檢測(cè)，84例神經(jīng)傳導(dǎo)速度和動(dòng)作電位波幅比健側(cè)低10%以上，10例未低于10%以上，假陰性率為10.6%。兩種方法的檢出率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），但同時(shí)應(yīng)用兩種檢測(cè)方法的假陰性率為0%（表1）。在70例下肢損傷者中，通過針極肌電圖檢測(cè)，64例出現(xiàn)失神經(jīng)電位，6例未出現(xiàn)，假陰性率為8.6%；通過神經(jīng)傳導(dǎo)檢測(cè)，61例神經(jīng)傳導(dǎo)速度和動(dòng)作電位波幅比健側(cè)低10%以上，9例未低于10%以上，假陰性率為12.9%。兩種方法的檢出率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），但同時(shí)應(yīng)用兩種檢測(cè)方法的假陰性率為0%（表2）。

2正常組檢測(cè)結(jié)果

在85例上肢正常者中，通過針極肌電圖檢測(cè)，6例出現(xiàn)失神經(jīng)電位，79例未出現(xiàn)，假陽性率為7.1%；通過神經(jīng)傳導(dǎo)檢測(cè)，4例神經(jīng)傳導(dǎo)速度和動(dòng)作電位波幅比左側(cè)低10%以上，81例未低于10%以上，假陽性率為4.7%。兩種方法的陰性率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），而同時(shí)應(yīng)用兩種檢測(cè)方法的假陽性率為0%（表3）。在53例下肢正常者中，通過針極肌電圖檢測(cè)，5例出現(xiàn)失神經(jīng)電位，48例未出現(xiàn)，假陽性率為9.4%；通過神經(jīng)傳導(dǎo)檢測(cè)，7例神經(jīng)傳導(dǎo)速度和動(dòng)作電位波幅比左側(cè)低10%以上，46例未低于10%以上，假陽性率為13.2%。兩種方法的陰性率比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），而同時(shí)應(yīng)用兩種檢測(cè)方法的假陽性率為0%（表4）。

討論

肌電圖是檢測(cè)周圍神經(jīng)損傷的重要方法之一，主要包括針極肌電圖和神經(jīng)傳導(dǎo)檢測(cè)，涉及失神經(jīng)電位、神經(jīng)傳導(dǎo)速度和動(dòng)作電位波幅等。隨著近年來臨床神經(jīng)電生理檢測(cè)技術(shù)的不斷發(fā)展，肌電圖檢測(cè)技術(shù)已廣泛應(yīng)用于臨床，但尚未在法醫(yī)學(xué)鑒定中引起足夠重視。

臨床上，肌電圖檢測(cè)在大多數(shù)情況下僅起到輔助參考作用，如神經(jīng)損傷的定性、定位等，在行肌電圖檢測(cè)時(shí)往往被許多診斷信息影響，如臨床表現(xiàn)、影像學(xué)資料、實(shí)驗(yàn)室檢查等，故需選擇性地進(jìn)行檢測(cè)，但對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)時(shí)則缺乏統(tǒng)一、規(guī)范的標(biāo)準(zhǔn)，大多是根據(jù)臨床經(jīng)驗(yàn)去判斷損傷與否。在法醫(yī)學(xué)鑒定中，我們面對(duì)的被鑒定人往往為了達(dá)到追究他人更重的刑事責(zé)任或獲取更多的賠償利益等目的，可能存在偽裝、夸大，甚至不配合等情況，一般的體格檢查較難真實(shí)、有效地反映其神經(jīng)損害后果，這就更需要鑒定人在現(xiàn)有的肌電圖檢測(cè)條件下，尋求并運(yùn)用更為合理、客觀的檢測(cè)方法、指標(biāo)，去偽存真，準(zhǔn)確評(píng)價(jià)周圍神經(jīng)的損傷情況。

本研究中，對(duì)于已證實(shí)周圍神經(jīng)損傷的受試者均予針極肌電圖及神經(jīng)傳導(dǎo)檢測(cè)，結(jié)果顯示，無論上肢還是下肢神經(jīng)損傷，兩種檢測(cè)方法的檢出率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但均存在一定的假陰性率（上肢損傷者的假陰性率分別為5.3%、10.6%，下肢損傷者的假陰性率分別為8.6%、12.9%），而同時(shí)應(yīng)用兩種檢測(cè)方法的假陰性率則為0%。對(duì)于確證存在神經(jīng)損傷者，僅行針極肌電圖檢測(cè)或神經(jīng)傳導(dǎo)檢測(cè)，可能由于神經(jīng)損傷類型不同、針刺部位不夠準(zhǔn)確、神經(jīng)損傷后恢復(fù)較為理想以及個(gè)體差異性較大等因素，未能檢測(cè)出明顯的失神經(jīng)電位或異常的神經(jīng)傳導(dǎo)速度，從而出現(xiàn)假陰性結(jié)果。因此，僅行單一的針極肌電圖檢測(cè)或神經(jīng)傳導(dǎo)檢測(cè)，均存在漏診的可能性，會(huì)將神經(jīng)損傷者誤認(rèn)為正常人，而同時(shí)應(yīng)用兩種檢測(cè)方法可有效避免假陰性的發(fā)生，提高檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確率。

篇10

關(guān)鍵詞：肺炎支原體抗體分型；被動(dòng)顆粒凝集檢測(cè)；臨床比較

目前，對(duì)于肺炎支原體感染的檢測(cè)多通過血清學(xué)檢查進(jìn)行，其中以抗體分型檢測(cè)和被動(dòng)顆粒凝集檢測(cè)最為常見，兩者可分別檢測(cè)血清各亞型（如特異性IgM、IgG、IgA抗體）的水平及各類型抗體水平的總和，從而反映是否發(fā)生肺炎支原體感染及其嚴(yán)重程度[1，2]。本研究選取我院收治的肺炎支原體感染者276例行抗體分型檢測(cè)和被動(dòng)顆粒凝集檢測(cè)，對(duì)比分析兩種方法的一致性及相關(guān)性，以期為肺炎支原體感染的檢測(cè)提供理論依據(jù)[3]。

1資料與方法

1.1一般資料 選取2013年3月～2015年3月于我院呼吸科、兒科等因咳嗽、發(fā)熱且經(jīng)門診治療無效者入院治療的疑似肺炎支原體感染276例為研究對(duì)象，所有患者均符合以下條件：①咳嗽、發(fā)熱等臨床癥狀持續(xù)1w以上，且經(jīng)自行服藥或者門診治療無效者；②各患者均參照肺炎支原體感染的診斷標(biāo)準(zhǔn)確診；③患者入院后服用抗生素，病情有所緩解者；④所有患者均自愿簽署知情同意書。納入研究的276例患者中男142例，女134例，年齡2～76歲，平均（30.2±14.7）歲。

1.2研究方法 276例患者自初診時(shí)收集血液樣本，-20℃保存?zhèn)溆茫謩e進(jìn)行抗體分型檢測(cè)和被動(dòng)顆粒凝集檢測(cè)。

1.2.1抗肺炎支原體抗體分型檢測(cè) 對(duì)于抗體分型檢測(cè)采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）進(jìn)行，包括IgM、IgG、IgA抗體的檢測(cè)，所用亞型抗體的檢測(cè)所使用的檢測(cè)試劑盒均由以色列Savyon Diagnostics公司生產(chǎn)，實(shí)驗(yàn)操作參照試劑盒說明書進(jìn)行。其中IgM、IgG、或IgA種亞型出現(xiàn)1項(xiàng)陽性者，即定義為ELISA結(jié)果陽性。

1.2.2被動(dòng)顆粒凝集檢測(cè) 凝集試驗(yàn)采用日本FUJIREBIO株式會(huì)社生產(chǎn)的SERODIA-MYCOⅡ檢測(cè)試劑盒進(jìn)行，設(shè)立陽性、陰性對(duì)照，具體操作按照試劑盒說明書實(shí)施。試驗(yàn)結(jié)果以滴度表示，以1：160作為閾值判斷結(jié)果是否呈陽性。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行處理，其中兩種檢測(cè)方法的符合率采用百分比表示，結(jié)果一致性分析行Kappa檢驗(yàn)，相關(guān)性分析采用Spearman相關(guān)系數(shù)進(jìn)行；此外，對(duì)于不同滴度、不同年齡的抗體亞型陽性率對(duì)比行Kruskal Wallis秩和檢驗(yàn)，均以P

2結(jié)果

2.1兩種檢測(cè)方法的一致性比較 抗體分型檢測(cè)及被動(dòng)顆粒凝集檢測(cè)的結(jié)果見表1，以被動(dòng)顆粒凝集檢測(cè)結(jié)果為準(zhǔn)，抗體分型檢測(cè)的陽性符合率為87.7%，陰性符合率為75.3%，總符合率為83.7%。兩種檢測(cè)方法的一致性檢驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，Kappa系數(shù)為0.705，P

2.2不同滴度組特異性抗體亞型陽性的分布 按照被動(dòng)顆粒凝集試驗(yàn)的結(jié)果，將患者按照滴度的差異分為低滴度組（1：160～1：320）、中滴度組（1：1640～1：1280）、高滴度組（1：2560），各組特異性抗體亞型陽性的分布情況見表2。隨著滴度的增加，IgM、IgA及亞型組合IgM/G/A陽性比例也逐漸增加（P0.05）。

2.3不同滴度組與病程的相關(guān)性 一般地，抗體分型能夠反映感染發(fā)生的進(jìn)程，血清檢測(cè)存在IgM陽性者表示為早期感染；而僅存在IgG抗體陽性則為既往感染；若存在IgM/G/A 3者均為陽性，或者IgM、IgG陽性或IgA、IgG陽性，則表示初次感染或現(xiàn)癥感染。以此為依據(jù)，低、中、高滴度組患者中現(xiàn)癥感染者的比例分別為76.9%、60.6%、97.6%。此外，在高滴度組41例患者中有38例患者確診為肺炎支原體感染。

3討論

目前檢測(cè)方法主要包括病原菌培養(yǎng)、PCR診斷技術(shù)及血清學(xué)檢測(cè)，其中，病原菌培養(yǎng)最為可靠，但其有耗時(shí)長、影響因素較多、陽性率低等缺點(diǎn)，不能滿足臨床快速診斷的需要；而PCR方法的應(yīng)用雖然提高了檢測(cè)的敏感性和特異性，但假陽性、假陰性結(jié)果偏高，也難以取得較為理想的結(jié)果。因此，目前仍多通過檢測(cè)肺炎支原體抗體進(jìn)行肺炎支原體感染的診斷。

對(duì)不同滴度組的抗體分型檢測(cè)結(jié)果顯示，被動(dòng)顆粒凝集檢測(cè)陽性者中以IgG亞型最為常見。對(duì)于IgM而言，其陽性例數(shù)隨著滴度的增加而顯著增加，低滴度組患者的IgM陽性率僅為10.6%，因此，被動(dòng)顆粒凝集檢測(cè)用于肺炎支原體感染檢測(cè)可能導(dǎo)致假陽性結(jié)果增加，這也一定程度上解釋了現(xiàn)階段肺炎支原體血清學(xué)檢測(cè)陽性率較實(shí)際感染率偏高。此外，在對(duì)被動(dòng)顆粒凝集檢測(cè)結(jié)果與病程的相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，僅高滴度組患者的病程情況與抗體分型檢測(cè)結(jié)果相一致，這可能與個(gè)體差異、是否具有感染病史、年齡等因素有關(guān)，在臨床診斷現(xiàn)癥感染時(shí)須同時(shí)進(jìn)行抗體IgM、IgG和IgA亞型的檢測(cè)。

參考文獻(xiàn)：

[1]張健，李莉，王文龍，等.肺炎支原體抗體分型檢測(cè)和被動(dòng)顆粒凝集檢測(cè)結(jié)果比較[J].中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2012，35（7）：12-14.