導(dǎo)語(yǔ)：如何才能寫(xiě)好一篇細(xì)胞遺傳學(xué)分析，這就需要搜集整理更多的資料和文獻(xiàn)，歡迎閱讀由公務(wù)員之家整理的十篇范文，供你借鑒。

篇1

關(guān)鍵詞：胚胎停育；絨毛組織；染色體分析

中圖分類號(hào)：R394.2

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號(hào)：1672－4208(2012)06－0011－02

胚胎停育是婦產(chǎn)科常見(jiàn)疾病，也是早期妊娠常見(jiàn)的并發(fā)癥，在自然流產(chǎn)中占很大比例，隨著全球環(huán)境污染的加劇和孕早期婦女感染的增加，胚胎停育發(fā)生率呈上升趨勢(shì)。絨毛組織是受精卵發(fā)育過(guò)程中胎盤(pán)的附屬物，因而與胚胎有相同的生物遺傳性；絨毛組織具有很強(qiáng)的分裂能力，通過(guò)體外培養(yǎng)可以得到足夠多的處于分裂中期的絨毛細(xì)胞，可以滿足細(xì)胞遺傳學(xué)及其他學(xué)科的研究需要。本研究對(duì)195例胚胎停育患者的細(xì)胞遺傳學(xué)分析，得出近一半胚胎停育的原因，為臨床提供可靠的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1　材料與方法

1.2材料　選取2010年5月至2011年9月來(lái)我院就診的195例經(jīng)B超檢測(cè)及內(nèi)分泌檢查確診的胚胎停育患者，孕周6～13周，患者年齡21～40歲。無(wú)菌條件下對(duì)患者進(jìn)行清宮手術(shù)，得到絨毛組織送檢。

1.2方法

1.2.1絨毛組織細(xì)胞培養(yǎng)　無(wú)菌條件下，用眼科剪刀剪取質(zhì)量上乘的絨毛細(xì)胞，轉(zhuǎn)移到無(wú)菌離心管口，用眼科剪刀盡量剪碎；加入絨毛細(xì)胞裂解液，37℃水浴作用10min，加1ml小牛血清終止消化；2000r／min轉(zhuǎn)速離心10分鐘，棄上清液，將絨毛細(xì)胞接種于含適量細(xì)胞培養(yǎng)液的組織培養(yǎng)瓶中，敞口放置于5％二氧化碳培養(yǎng)箱中。2天后在倒置顯微鏡下觀察有貼壁生長(zhǎng)的絨毛細(xì)胞時(shí)，換新鮮培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，當(dāng)出現(xiàn)較大細(xì)胞集落和中期細(xì)胞時(shí)，加秋水仙堿終止培養(yǎng)，制備絨毛染色體。

1.2.2絨毛染色體制備與核型分析　用細(xì)胞刮刀將絨毛細(xì)胞刮下，轉(zhuǎn)移至離心管中，離心棄上清液；加入1％枸櫞酸鈉低滲液，37℃低滲12min；加1ml固定液(甲醇：乙酸=3：1)預(yù)固定；離心棄上清液，加6ml固定液固定2次，每次都離心棄上清液；加1ml固定液滴片。70℃烤片，胰酶消化，Gimsa染液染色，鏡檢分析核型，計(jì)數(shù)15個(gè)核型，并分析1～2個(gè)核型。

2　結(jié)果

195例胚胎停育患者絨毛組織培養(yǎng)成功193例，培養(yǎng)成功率為98.97％，染色體分析193例，檢出染色體異常103例，異常檢出率52.82％；其中三體60例，占異常核型的58.25％；45，X為20例，三倍體為11例，四倍體為9例；其他異常核型為3例。

3　討論

在婦產(chǎn)科臨床工作中統(tǒng)計(jì)，約15％的妊娠發(fā)生流產(chǎn)，其中50％～60％的早期胚胎停育造成的流產(chǎn)是因?yàn)榕咛ト旧w異常引起的。根據(jù)達(dá)爾文的自然選擇學(xué)說(shuō)：自然選擇，優(yōu)勝劣汰；胚胎停育造成的自然流產(chǎn)是人類進(jìn)行優(yōu)生優(yōu)育自身選擇的機(jī)制，從而保證人類物種的穩(wěn)定性。對(duì)胚胎停育的絨毛組織細(xì)胞遺傳學(xué)研究，不僅可以為本次胚胎停育的原因提供理論依據(jù)，還可以為下次受孕提供臨床指導(dǎo)意義。

本次研究結(jié)果中，胚胎停育的絨毛染色體異常檢出率52.82％，其中三體60例，占異常核型的58.25％；45，X為20例，45，X為最多的異常核型，與其它的此類研究結(jié)果相符合。結(jié)果表明：常染色體數(shù)目異常是導(dǎo)致胚胎停育的主要原因，可能是由于遺傳學(xué)上這些常染色體多還有重要的遺傳信息，遺傳信息的異常就會(huì)導(dǎo)致胚胎發(fā)育的異常，從而胚胎早期時(shí)就停止發(fā)育，符合優(yōu)勝劣汰原則。胚胎染色體異常多發(fā)生在受精卵發(fā)育的早期，一方面是由于生殖細(xì)胞在減數(shù)分裂期染色體發(fā)生不分離；另一方面是正常的受精卵在早期發(fā)育時(shí)，由于某種原因有絲分裂發(fā)生不平衡分裂，從而造成胚胎染色體的異常。

篇2

題目：表觀遺傳學(xué)調(diào)控NK細(xì)胞分化及功能的研究進(jìn)展

表觀遺傳學(xué) (epigenetics) 是指在基因核苷酸序列不發(fā)生變化的情況下, 通過(guò)對(duì)轉(zhuǎn)錄表達(dá)的調(diào)控和轉(zhuǎn)錄后的調(diào)控使基因表達(dá)發(fā)生變化, 包括DNA甲基化、組蛋白共價(jià)修飾、染色質(zhì)重塑、基因印記、及非編碼RNA、微小RNA (miRNA) 、反義RNA轉(zhuǎn)錄后調(diào)控等[1]。環(huán)境、年齡改變、壓力、疾病狀態(tài)等, 均可以引起免疫細(xì)胞表觀遺傳學(xué)改變, 造成免疫系統(tǒng)功能紊亂, 導(dǎo)致疾病的發(fā)生與進(jìn)展。因此, 表觀遺傳學(xué)逐漸成為免疫學(xué)研究的熱點(diǎn)。

自然殺傷細(xì)胞 (natural killer cell, NK) 是天然免疫細(xì)胞, 主要來(lái)源于造血干細(xì)胞, 全身廣泛分布。NK細(xì)胞通過(guò)一系列細(xì)胞生物學(xué)過(guò)程獲得激活信號(hào), 包括胞外鈣離子內(nèi)流、細(xì)胞骨架重排以及與靶細(xì)胞接觸部位免疫突觸形成, 最終通過(guò)分泌細(xì)胞因子、趨化因子及釋放毒性顆粒執(zhí)行清除病毒、腫瘤細(xì)胞以及發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)功能。NK細(xì)胞功能異常導(dǎo)致多種疾病發(fā)生, 包括感染、腫瘤及自身免疫疾病[2,3]。近年來(lái), 有很多學(xué)者先后報(bào)道了表觀遺傳學(xué)改變對(duì)NK細(xì)胞增殖、分化及功能的影響, 為NK細(xì)胞研究提供了新思路, 為新藥的臨床應(yīng)用奠定了理論基礎(chǔ)。本文對(duì)NK細(xì)胞的表觀遺傳學(xué)研究進(jìn)展作一綜述。

1 表觀遺傳學(xué)對(duì)NK細(xì)胞分化的影響

人類NK細(xì)胞表面特異性表達(dá)CD56或CD16分子, 根據(jù)其表達(dá)水平將NK細(xì)胞分為CD3-CD56bright CD16- (CD56bright) 、CD3-CD56dimCD16+ (CD56dim) 、CD3-CD56-CD16+3個(gè)亞群[4]。其中CD56bright亞群為調(diào)節(jié)性NK細(xì)胞, 可以參與適應(yīng)性免疫調(diào)節(jié), 通過(guò)分泌細(xì)胞因子和趨化因子 (IFN-、TNF-、IL-10、IL-13和GM-CSF) 對(duì)樹(shù)突狀細(xì)胞 (DCs) 、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞 (Tregs) 、輔T細(xì)胞 (Ths) 及細(xì)胞毒性T細(xì)胞 (CTLs) 等進(jìn)行免疫調(diào)控[5]。在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎中, NK細(xì)胞可以通過(guò)分泌IFN-誘導(dǎo)B細(xì)胞活化, 促進(jìn)DC細(xì)胞成熟, 并可抑制T細(xì)胞向Th17細(xì)胞分化[6]。NK細(xì)胞分泌IFN-可以促進(jìn)DC細(xì)胞分泌IL-27, 而IL-27可促進(jìn)IFN-分泌, 這種正反饋參與抑制Th17介導(dǎo)的自身免疫疾病[7]。人和小鼠NK細(xì)胞均可通過(guò)分泌IFN-可以抑制CD4+T細(xì)胞向Tregs分化[8]。CD56dim為功能性NK細(xì)胞, 通過(guò)穿孔素/顆粒酶途徑、Fas/FasL途徑、TNF-а/TNFR-1途徑、以及抗體依賴的細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性作用 (ADCC) 完成對(duì)靶細(xì)胞的直接殺傷。近期也有研究者發(fā)現(xiàn), 功能性NK細(xì)胞參與適應(yīng)性免疫的調(diào)節(jié), 直接殺傷適應(yīng)性免疫細(xì)胞, 如Th17及濾泡輔T細(xì)胞 (Tfh) [9]。而CD3-CD56-CD16+亞群目前研究較少, 目前認(rèn)為主要發(fā)揮ADCC作用。

表觀遺傳學(xué)修飾在NK細(xì)胞的分化、成熟中發(fā)揮了重要作用。早期的研究顯示, IL-15受體信號(hào)通路對(duì)NK細(xì)胞的分化成熟至關(guān)重要, E4BP4 (NFIL3) 在其中發(fā)揮調(diào)節(jié)作用, 促進(jìn)了造血干細(xì)胞 (HSC) 向NK細(xì)胞分化。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)顯示, E4BP4基因缺陷小鼠NK細(xì)胞減少、功能下降, 而過(guò)表達(dá)E4BP4可增加Id2和Gata3的轉(zhuǎn)錄, 從而促進(jìn)HSC向NK細(xì)胞分化增加[10]。在NK細(xì)胞發(fā)育中, 組蛋白甲基化也具有重要調(diào)控作用。Yin等[11]研究了zeste基因增強(qiáng)子同源物2 (EZH2) 對(duì)早期NK細(xì)胞分化的影響。EZH2作為重要的表觀遺傳修飾酶, 是PcG (polycomb group) 蛋白家族的重要成員, 在調(diào)控基因表達(dá)的過(guò)程中起關(guān)鍵作用[12]。EZH2主要對(duì)組蛋白H3K27進(jìn)行甲基化, 從而沉默下游基因, 在細(xì)胞增殖、分化及腫瘤形成方面都有重要作用[13]。研究者[11]發(fā)現(xiàn), 在小鼠及人中, 選擇性失活EZH2或用小分子抑制其活性后, 可以增加IL-15受體 (CD122+) 陽(yáng)性的NK祖細(xì)胞數(shù)量, 并促進(jìn)成熟NK細(xì)胞增殖。NK細(xì)胞的擴(kuò)增及殺傷作用還與CD122及NKG2D有關(guān), NKG2D缺失可降低EZH2抑制劑對(duì)促進(jìn)NK細(xì)胞增殖及分化的作用。另外, Tsuyama等[14]研究報(bào)道, NKT細(xì)胞淋巴瘤患者存在組蛋白去甲基化酶KDM6A基因突變, 此基因與血液腫瘤關(guān)系密切, 可能影響NK細(xì)胞的增殖。

FcRIIIA (CD16a) 由FCGR3A編碼, 為NK細(xì)胞在成熟過(guò)程中獲得。研究發(fā)現(xiàn), 在CD16a+細(xì)胞中, FCGR3A啟動(dòng)子中轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)的甲基化水平較CD16a-細(xì)胞和中性粒細(xì)胞明顯降低。此外, 研究者還發(fā)現(xiàn)miR-218是NK細(xì)胞CD16a轉(zhuǎn)錄后的負(fù)調(diào)控因子。在NK細(xì)胞中過(guò)度表達(dá)miR-218可降低CD16a的mRNA和蛋白表達(dá)水平, miR-218在CD16a-細(xì)胞中水平明顯高于CD16a+細(xì)胞。因此, 研究者推斷, FCGR3A的轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)甲基化及轉(zhuǎn)錄后miR-218的調(diào)控作用可以通過(guò)改變CD16a的表達(dá)來(lái)調(diào)節(jié)NK細(xì)胞的分化成熟[15]。

記憶性NK細(xì)胞的概念由Sun等[16]最早提出。這類NK細(xì)胞可以長(zhǎng)期存活, 具有免疫記憶功能, 當(dāng)再次接觸到記憶抗原時(shí)被激活。多種病毒可以誘導(dǎo)記憶性NK細(xì)胞產(chǎn)生, 目前報(bào)道的有巨細(xì)胞病毒, 單純皰疹病毒、人類免疫缺陷病毒等[17,18]。記憶性NK細(xì)胞表達(dá)CD57和NKG2C, 不表達(dá)FcR、SYK、DAB2、ETA-2、PLZF和ILZF2。FcR、ETA-2、SYK的缺乏均有表觀遺傳學(xué)機(jī)制的參與[19,20]。IL-12信號(hào)通路通過(guò)其下游轉(zhuǎn)錄因子信號(hào)和轉(zhuǎn)錄因子4 (STAT4) 的激活影響記憶性NK細(xì)胞的擴(kuò)增。Rapp等[21]發(fā)現(xiàn)Runx1和Runx3的啟動(dòng)子區(qū)域是STAT4的結(jié)合位點(diǎn), 在NK細(xì)胞活化過(guò)程中, STAT4的結(jié)合會(huì)誘導(dǎo)RUNX基因位點(diǎn)的表觀遺傳學(xué)修飾, 從而導(dǎo)致表達(dá)增加。在病毒感染中, Runx1和Runx3或它們的伴侶分子表達(dá)減低是影響NK細(xì)胞擴(kuò)增及記憶NK細(xì)胞形成障礙的原因。該研究證明, STAT4介導(dǎo)的Runx轉(zhuǎn)錄因子表觀遺傳學(xué)修飾可以調(diào)節(jié)NK細(xì)胞對(duì)病毒的適應(yīng)行為。

2 表觀遺傳學(xué)對(duì)NK細(xì)胞功能的影響

NK細(xì)胞的功能主要包括殺傷及免疫調(diào)節(jié)作用。有研究顯示, 在NK細(xì)胞活化過(guò)程中, 81%的主要位點(diǎn)出現(xiàn)CpG去甲基化, 生物學(xué)分析顯示差異甲基化位點(diǎn)主要集中在免疫調(diào)節(jié)功能中 (如TNFA、LTA、IL-13、CSF2等) [22], 這提示表觀遺傳學(xué)修飾參與了NK細(xì)胞的活化, 并與NK細(xì)胞功能關(guān)系密切。

2.1 表觀遺傳學(xué)修飾對(duì)NK細(xì)胞表面受體的調(diào)節(jié)作用

NK細(xì)胞表面激活性受體與抑制性受體的相互平衡, 在NK細(xì)胞功能中發(fā)揮了重要調(diào)節(jié)作用。如激活性受體表達(dá)占優(yōu), 則NK細(xì)胞活化, 反之, NK細(xì)胞處于靜止?fàn)顟B(tài)。

有學(xué)者[23,24,25]檢測(cè)了NK細(xì)胞免疫球蛋白樣受體 (KIR) 啟動(dòng)子的甲基化水平, 結(jié)果發(fā)現(xiàn), 處于靜息狀態(tài)的人NK細(xì)胞92細(xì)胞系中KIR2DL1、KIR2DL2/L3高甲基化, 同時(shí), 細(xì)胞表面的KIR表達(dá)降低。當(dāng)應(yīng)用5-氮雜胞苷進(jìn)行去甲基化處理后, KIR啟動(dòng)子去甲基化, NK細(xì)胞表面KIR表達(dá)明顯增加。另外, KIR的表達(dá)受miRNA調(diào)節(jié)。PIWI樣RNA可以誘導(dǎo)KIR雙向啟動(dòng)子KIR3DL1產(chǎn)生KIR反義轉(zhuǎn)錄本, 影響雙鏈DNA的合成, 可減少90%的KIR表達(dá)[25]。

NKG2D是NK細(xì)胞激活性受體, 其表達(dá)增加可增強(qiáng)NK細(xì)胞功能。NKG2D通過(guò)識(shí)別不同的配體家族 (MICA、MICB、ULBPs 1-6等) 參與激活效應(yīng)細(xì)胞、溶解靶細(xì)胞。NKG2D基因在NKG2D+NK細(xì)胞中去甲基化, 并與組蛋白H3賴氨酸9乙?；?(H3K9Ac) 相關(guān)。用組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶 (HAT) 抑制劑 (姜黃素) 可以明顯下調(diào)NKG2D基因H3K9乙?；? 進(jìn)而下調(diào)NKG2D的轉(zhuǎn)錄, 導(dǎo)致NKG2D表達(dá)減低, NK細(xì)胞殺傷功能下降。此研究提示NKG2D在NK細(xì)胞表面表達(dá)差異是由表觀遺傳學(xué)機(jī)制調(diào)節(jié)的, 并可以通過(guò)表觀遺傳治療改善[26]。組蛋白去乙?；敢种苿┍焖?(VPA) 通過(guò)激活基因啟動(dòng)子中組蛋白K9的高甲基化和DNA甲基化, 從而下調(diào)NKG2D的表達(dá)[27]。同樣, miRNA也可發(fā)揮對(duì)NKG2D的調(diào)節(jié)作用。在HCV感染患者的NK細(xì)胞中, miR-182與對(duì)照組相比過(guò)表達(dá), miR-182表達(dá)升高可降低NKG2D的mRNA水平, 而miR-182抑制劑能降低抑制性受體NKG2A的mRNA水平[28]。

2.2 表觀遺傳學(xué)修飾對(duì)NK細(xì)胞細(xì)胞因子分泌水平的調(diào)節(jié)作用

NK細(xì)胞分泌細(xì)胞因子同樣受到表觀遺傳學(xué)修飾的調(diào)節(jié)。Luetke-Eversloh等[29]報(bào)道, NK細(xì)胞受到刺激后, IFN-及T-bet位點(diǎn)轉(zhuǎn)錄增加, 并發(fā)生去甲基化, 從而增加IFN-的分泌。Li等[30]發(fā)現(xiàn), 在NK細(xì)胞激活過(guò)程中, 組蛋白去甲基化酶及甲基轉(zhuǎn)移酶發(fā)生明顯變化。在NK92細(xì)胞系中, 與NK細(xì)胞激活密切相關(guān)的PI3KCA, 、NFATC1及TNFSF9等基因, 經(jīng)PMA和依諾霉素刺激可出現(xiàn)H3K4me3和H3K27甲基化修飾, 從而調(diào)控上述基因表達(dá)。采用H3K4和H3K37的特異性抑制劑可以增加NK細(xì)胞脫顆粒及IFN-、TNF-的分泌[22,30]。Cribbs等[31]用染色質(zhì)甲基化及乙?；男》肿右种苿┻M(jìn)行篩選, 并通過(guò)基因敲除方法確定了Jumonli型組蛋白H3K27脫甲基酶是NK細(xì)胞分泌細(xì)胞因子的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子。JMJD3/UTX (含有Jumonji結(jié)構(gòu)域的蛋白3) H3K27去甲基化酶抑制劑GSK-J4可引發(fā)細(xì)胞因子轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)H3K27甲基化, 并造成NK細(xì)胞IFN-、TNF-、GM-CSF、IL-10分泌下降。GSK-J4可以明顯抑制類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者外周血或組織中分離出的NK細(xì)胞的細(xì)胞因子分泌, 抑制破骨細(xì)胞形成及骨破壞。除甲基化外, 組蛋白乙?；揎椧矊?duì)NK細(xì)胞細(xì)胞因子分泌起調(diào)節(jié)作用。VPA可抑制NK細(xì)胞對(duì)白血病細(xì)胞的溶解, 并且有劑量依賴性。VPA預(yù)處理可降低NK細(xì)胞IFN-分泌, 破壞CD107A脫顆粒, 并通過(guò)激活PD-1/PD-L1途徑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡[27]。

H3K4me3脫甲基酶KDM5A調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄并參與腫瘤的發(fā)生。Zhao等[32]研究證明KDM5A缺陷使IFN-產(chǎn)生減少, 并損害NK細(xì)胞的活化。KDM5A (-/-) 小鼠對(duì)單核細(xì)胞增生李斯特氏菌 (LM) 感染高度敏感。在NK細(xì)胞活化過(guò)程中, KDM5A的缺失影響STAT4磷酸化和核定位, 并增加了細(xì)胞因子信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制因子1 (SOCS1) 的表達(dá)。進(jìn)一步研究揭示其機(jī)制為KDM5A與P50結(jié)合, 并與靜止NK細(xì)胞中的SOCS1啟動(dòng)子區(qū)結(jié)合, 抑制染色質(zhì)重塑, 導(dǎo)致在SOCS1啟動(dòng)子中H3K4me3修飾顯著減少。

另外, Lee等[19]在研究記憶性NK細(xì)胞時(shí)發(fā)現(xiàn), 人巨細(xì)胞病毒感染后, NK細(xì)胞Syk轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)甲基化, Syk基因沉默, 可引起表達(dá)IFN-水平升高。BHLHE40為轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子, 在活化的NK細(xì)胞中去甲基化, 誘導(dǎo)細(xì)胞因子分泌 (如IL-2、IL-12、IL-15、IFN、TNFA等) , 增強(qiáng)NK細(xì)胞功能。NFAT轉(zhuǎn)錄因子家族通過(guò)與啟動(dòng)子及增強(qiáng)子區(qū)域結(jié)合來(lái)增加NK細(xì)胞因子的表達(dá)。在活化的NK細(xì)胞中, NFATC1內(nèi)含子9明顯去甲基化, 可調(diào)節(jié)NK細(xì)胞分泌細(xì)胞因子[22]。

3 引起NK細(xì)胞表觀遺傳學(xué)變化的因素

多種疾病狀態(tài)下, NK細(xì)胞的表觀遺傳學(xué)修飾會(huì)發(fā)生變化, 如巨細(xì)胞病毒感染會(huì)激活NK細(xì)胞, 引起81%的位點(diǎn)發(fā)生DNA去甲基化[22]。在兒童哮喘患者中, NK細(xì)胞DNA去甲基化, 引起NK細(xì)胞活性升高[33]。在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎及強(qiáng)制性脊柱炎中, NK細(xì)胞均存在表觀遺傳學(xué)改變[31,32,33,34]。

一些藥物可以引起NK細(xì)胞的表觀遺傳修飾變化。Misale等[35]報(bào)道, 糖皮質(zhì)激素可以通過(guò)影響H3K27me3來(lái)降低IFN-的表達(dá), 從而抑制NK細(xì)胞的免疫功能。5-氮雜胞苷可引起NK細(xì)胞DNA去甲基化, 誘導(dǎo)相關(guān)基因激活, 促進(jìn)NK細(xì)胞活化[36]。

運(yùn)動(dòng)也可以引起NK細(xì)胞表觀遺傳學(xué)修飾發(fā)生改變。Zimmer等[37]選取30例非霍奇金淋巴瘤患者及10名健康人, 干預(yù)組每人每天騎車運(yùn)動(dòng)30min。運(yùn)動(dòng)組的患者血清巨噬細(xì)胞游走抑制因子 (MIF) 及IL-6水平升高, NK細(xì)胞組蛋白H3、H4乙酰化水平降低。近期, 研究者再次證明運(yùn)動(dòng)可以通過(guò)升高組蛋白乙酰化水平及NKG2D的表達(dá), 改善正常人NK細(xì)胞活化狀態(tài)[38]。

壓力及年齡的增長(zhǎng)對(duì)NK細(xì)胞的表觀遺傳學(xué)也有明顯影響。創(chuàng)傷后應(yīng)激綜合征可以加速NK細(xì)胞由年齡造成的甲基化水平升高, 從而影響機(jī)體免疫狀態(tài)[39]。

綜上所述, 表觀遺傳學(xué)修飾影響著NK細(xì)胞的增殖、分化、殺傷、免疫調(diào)節(jié)等, 在NK細(xì)胞調(diào)控中, 扮演重要角色。但目前, NK細(xì)胞表觀遺傳學(xué)研究多集中在基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)階段, 在臨床疾病中的應(yīng)用很少。NK細(xì)胞參與腫瘤、自身免疫疾病及感染的發(fā)病, 其異常是否與表觀遺傳學(xué)修飾有關(guān)?進(jìn)一步研究NK細(xì)胞表觀遺傳學(xué)異常在疾病發(fā)生中的作用, 將基礎(chǔ)研究向臨床應(yīng)用轉(zhuǎn)化, 開(kāi)拓疾病中NK細(xì)胞功能異常的新思路, 并為新型藥物在臨床中的應(yīng)用提供研究基礎(chǔ), 將是本課題組今后努力的方向。

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篇3

關(guān)鍵詞：動(dòng)物遺傳學(xué) 動(dòng)物科學(xué) 遺傳檢測(cè) 細(xì)胞遺傳學(xué) 分子遺傳學(xué)

中圖分類號(hào)：G642.0 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：C DOI：10.3969/j.issn.1672-8181.2013.23.150

動(dòng)物遺傳學(xué)是動(dòng)物科學(xué)專業(yè)的重要專業(yè)基礎(chǔ)課程。遺傳學(xué)具有基礎(chǔ)理論抽象、邏輯思維強(qiáng)、知識(shí)面涵蓋廣等特點(diǎn)，是動(dòng)物育種的理論基礎(chǔ)。遺傳學(xué)的基本概念和原理來(lái)自于生產(chǎn)、生活和科學(xué)研究的實(shí)踐，遺傳學(xué)實(shí)驗(yàn)是遺傳學(xué)教學(xué)中重要的環(huán)節(jié)，是理論教學(xué)的深化和補(bǔ)充。近些年，隨著遺傳學(xué)的不斷發(fā)展，取得了很多的進(jìn)展，特別是隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，遺傳學(xué)進(jìn)入了全新的分子遺傳學(xué)時(shí)代，較之之前的形態(tài)遺傳學(xué)、細(xì)胞遺傳學(xué)而言，分子遺傳學(xué)更為抽象，因此，長(zhǎng)期沿用下來(lái)的經(jīng)典遺傳學(xué)實(shí)驗(yàn)顯然已經(jīng)不能滿足遺傳學(xué)快速發(fā)展的需求，從而對(duì)遺傳學(xué)相關(guān)實(shí)驗(yàn)課提出了更高的要求。

針對(duì)以上情況，結(jié)合我校動(dòng)物科學(xué)專業(yè)設(shè)置的實(shí)際情況，經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期的摸索和創(chuàng)新，我校動(dòng)物科學(xué)學(xué)院近年來(lái)開(kāi)始開(kāi)設(shè)了實(shí)用遺傳檢測(cè)技術(shù)課程，學(xué)時(shí)120學(xué)時(shí)。主要通過(guò)實(shí)驗(yàn)制備和觀察，使學(xué)生從細(xì)胞、分子及群體水平上掌握遺傳學(xué)的實(shí)驗(yàn)操作方法；學(xué)會(huì)基本儀器設(shè)備的使用技巧；了解遺傳學(xué)研究方法和手段，進(jìn)一步加強(qiáng)學(xué)生獨(dú)立分析問(wèn)題和解決問(wèn)題的能力，獨(dú)立操作和創(chuàng)新能力及培養(yǎng)學(xué)生的動(dòng)手能力。同時(shí)注意培養(yǎng)學(xué)生實(shí)事求是，嚴(yán)肅認(rèn)真的科學(xué)操作和良好的實(shí)驗(yàn)習(xí)慣，為今后的工作和研究打下良好基礎(chǔ)。本文將就本課程的設(shè)置進(jìn)行綜述，旨在為相關(guān)學(xué)科今后在遺傳學(xué)相關(guān)實(shí)驗(yàn)課程的開(kāi)設(shè)方面提供借鑒。

1 細(xì)胞遺傳學(xué)篇

細(xì)胞遺傳學(xué)是研究細(xì)胞中染色體遺傳規(guī)律的學(xué)科。 同時(shí)也是在細(xì)胞層次上進(jìn)行遺傳學(xué)研究的遺傳學(xué)分支學(xué)科。著重研究細(xì)胞中染色體的起源、組成、變化、行為和傳遞等機(jī)制及其生物學(xué)效應(yīng)。

圍繞細(xì)胞遺傳學(xué)，設(shè)立了如下實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目：①細(xì)胞培養(yǎng)。主要講解細(xì)胞的體外培養(yǎng)原理、條件、技巧和注意事項(xiàng)。主要通過(guò)采集動(dòng)物外周血培養(yǎng)2個(gè)周期，用以觀察培養(yǎng)細(xì)胞在體外分裂情況；②培養(yǎng)細(xì)胞的同步化處理。主要講解在體外培養(yǎng)條件下同步化處理的原理、條件、技巧和注意事項(xiàng)。處理培養(yǎng)細(xì)胞分裂中期同步化；③外周血淋巴細(xì)胞染色體標(biāo)本制作。主要包括以下過(guò)程：收集細(xì)胞低滲處理固定涂片染色觀察；④骨髓細(xì)胞染色體標(biāo)本的制備。主要包括以下過(guò)程：秋水仙素處理取管狀骨沖取骨髓細(xì)胞低滲處理固定涂片染色觀察；⑤果蠅唾液腺染色體標(biāo)本的制備。主要包括以下過(guò)程：培養(yǎng)果蠅三齡幼蟲(chóng)解剖分離唾液腺水解處理染色壓片觀察；⑥染色體顯G帶。主要包括以下過(guò)程：制備染色體標(biāo)本片胰蛋白酶處理染色觀察；⑦各種顯微鏡的調(diào)試實(shí)用實(shí)踐。主要包括熟悉普通研究顯微鏡，相差顯微鏡，暗場(chǎng)顯微鏡，熒光顯微鏡的光路合軸、聚光器調(diào)焦、濾鏡選用等操作；⑧染色體標(biāo)本的觀察照相。主要包括以下過(guò)程：顯微鏡下觀察制備好的染色體標(biāo)本片統(tǒng)計(jì)分裂相的比例數(shù)細(xì)胞染色體數(shù)選形態(tài)良好數(shù)目占眾數(shù)的分裂相拍照；⑨染色體核型分析。主要包括以下過(guò)程：染色體照片photoshop軟件裁剪整理同源染色體配對(duì)排序測(cè)染色體臂長(zhǎng)計(jì)算相對(duì)長(zhǎng)度和臂比。

2 分子遺傳學(xué)篇

隨著遺傳學(xué)的迅猛發(fā)展，分子遺傳學(xué)已經(jīng)滲透到了遺傳學(xué)的各個(gè)角度，分子遺傳學(xué)也因此在教學(xué)中已經(jīng)占有了相當(dāng)大的比重。分子遺傳學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)也成為研究者使用得最多的分析手段，這就進(jìn)一步要求我們的實(shí)驗(yàn)教學(xué)也要適應(yīng)遺傳學(xué)的發(fā)展。

圍繞分子遺傳學(xué)，設(shè)立了如下實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目：①動(dòng)物組織（肌肉）中DNA的提取。主要包括以下過(guò)程：采集動(dòng)物組織材料破壞細(xì)胞膜和核膜白和DNA分離抽提純化DNA乙醇沉淀DNA檢測(cè)DNA純度和量；②動(dòng)物性別鑒定。主要包括以下過(guò)程：提取動(dòng)物組織DNAsry特異引物PCR擴(kuò)增電泳判斷；③DNA酶切電泳。主要包括以下過(guò)程：λDNA限制性內(nèi)切酶酶切瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)；④動(dòng)物來(lái)源物種鑒定。主要包括以下過(guò)程：樣品采集基因組DNA提取PCR-RFLP瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)判斷；⑤動(dòng)物組織總RNA的提取。主要包括以下過(guò)程：樣品采集RNA提取瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)；⑥Total RNA質(zhì)量的檢測(cè)及cDNA的制備。主要包括以下過(guò)程：紫外分光光度計(jì)檢測(cè)Total RNA質(zhì)量反轉(zhuǎn)錄cDNA檢測(cè)；⑦microRNA指紋圖譜技術(shù)（MTFP）在肉品質(zhì)檢測(cè)中的應(yīng)用。主要包括以下過(guò)程：樣品采集總RNA提取及檢測(cè)cDNA的制備及檢測(cè)PCR反應(yīng)及檢測(cè)PAGE電泳檢測(cè)和分析；⑧PCR-RFLP鑒定ABO基因型。主要包括以下過(guò)程：毛囊（毛發(fā)）中總DNA的提取及電泳檢測(cè)糖基轉(zhuǎn)移酶基因片段擴(kuò)增及電泳檢測(cè)擴(kuò)增片段限制性酶切及電泳檢測(cè)。

遺傳學(xué)是研究生物遺傳和變異的科學(xué)。隨著現(xiàn)代生物科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，遺傳學(xué)已成為生命科學(xué)領(lǐng)域中發(fā)展最為迅速的基礎(chǔ)學(xué)科之一，而實(shí)驗(yàn)實(shí)踐教學(xué)環(huán)節(jié)為培養(yǎng)學(xué)生的科學(xué)思維、探索思維和實(shí)踐創(chuàng)新能力提供重要途徑，并且可以提高學(xué)生的實(shí)際動(dòng)手能力和分析問(wèn)題、解決問(wèn)題的能力。遺傳學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)和方法是遺傳學(xué)建立和發(fā)展的基礎(chǔ)，如今現(xiàn)代的遺傳學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)已廣泛滲透到生命科學(xué)的各個(gè)分支領(lǐng)域，并正在發(fā)揮其獨(dú)特的作用。本文通過(guò)數(shù)名長(zhǎng)期工作在遺傳學(xué)本科教學(xué)一線的教師多年的教學(xué)實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)，結(jié)合動(dòng)物科學(xué)專業(yè)設(shè)置的特色，摸索了一套適合動(dòng)物科學(xué)專業(yè)本科生實(shí)際的實(shí)驗(yàn)課教學(xué)體系，旨在為培養(yǎng)理論與實(shí)踐兼?zhèn)涞母咚刭|(zhì)動(dòng)物科學(xué)方向的本科生做出一定的貢獻(xiàn)，也期望為國(guó)內(nèi)同行遺傳學(xué)教學(xué)相關(guān)實(shí)驗(yàn)課的開(kāi)設(shè)提供一定的借鑒作用。

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作者簡(jiǎn)介：蘇蕊，內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)科院，內(nèi)蒙古呼和浩特 010018

張燕軍，內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)科院，內(nèi)蒙古呼和浩特 010018

篇4

[關(guān)鍵詞] 白血病,髓系,急性;染色體核型;WHO 分型

[中圖分類號(hào)] R733.31 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A[文章編號(hào)] 1673-9701(2010)12-03-03

Relationship between Chromosome Karyotype and Induction Success in Acute Myeloid Leukemia

PAN Xin1WANG Xiaomin2CHI Hongmei2ZHU Lin2LI Yan2FU Ling2MAO Min2ZHANG Xiaoyan2

1.Postgraduate College of Xinjiang Medical University, Urumuqi 830000,China;2.Department of Hematology,People’sHospital of Xinjiang Uygur Autonomous Region, Urumuqi 830000,China

[Abstract] Objective To explore the role of chromosome karyotype in the WHO classification of acute myeloid leukemia(AML). Methods One hundred and seven patients were diagnosed as AML according to the WHO classification. A comparative analysis was made of the complete remission rate(CR) of preoperative induction chemotherapy between the various subtypes. Results In 107 cases of AML,36 cases(33.6%) showedthe recurrent chromosome abnormalities and chromosome karyotype was of favorable risk, 24 cases(22.4%) showed multilineage dysplasia,17 cases were of intermediate risk and 7 cases were of high risk. And other 47 cases(43.0%) failed to be categorized,in which 39 cases were of intermediate risk and 8 cases were of high risk. The CR rate of induction chemotherapy in the AML cases with t(8;21)and AML with inv(16)or t(16;16)was significantly higher than that of those cases that failed to be categorized(P

[key words] Leukemia;Myeloid,acute;Chromosome karyotype;WHO classification

“WHO 造血組織和淋巴組織腫瘤分類方案(2001)”以白血病免疫學(xué)、細(xì)胞遺傳學(xué)、分子生物學(xué)特征更新了白血病的診斷,使其與現(xiàn)代白血病治療策略的制定相適應(yīng)[1,2],其中細(xì)胞遺傳學(xué)分析對(duì)于AML尤為重要,大多數(shù)AML患者都存在非隨機(jī)的染色體異常,對(duì)于診斷分型、治療選擇及療效評(píng)價(jià)有至關(guān)重要的作用[3,4]。本文對(duì)我院按WHO 標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分型診斷的107例AML患者的完全緩解率進(jìn)行分析,并探討細(xì)胞遺傳學(xué)的作用,現(xiàn)報(bào)道如下。

1資料與方法

1.1病例選擇

2007年3月～2009 年6月按WHO標(biāo)準(zhǔn)確診的初治AML患者共107例,其中男69例,女38 例。平均年齡為45.5(3～79)歲。

1.2分型

按WHO 標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分型:結(jié)合患者的臨床病史、細(xì)胞形態(tài)學(xué)、細(xì)胞/分子遺傳學(xué)、免疫表型分析等資料按WHO 標(biāo)準(zhǔn)[1,2]進(jìn)行診斷分型。具體方法如下:分類計(jì)數(shù)患者的骨髓片和血片,分類計(jì)數(shù)200個(gè)骨髓有核細(xì)胞和100個(gè)外周血有核細(xì)胞。原始細(xì)胞計(jì)數(shù)方法為:原始細(xì)胞包括原始粒細(xì)胞I 型和原始粒細(xì)胞Ⅱ型,此外M2b是以異常的中性中幼粒細(xì)胞為主,M4和M5還包括原始和幼稚單核細(xì)胞,M7還包括原始巨核細(xì)胞,急性早幼粒細(xì)胞白血病(APL)還包括異常早幼粒細(xì)胞。單獨(dú)分類各系細(xì)胞確定各系發(fā)育異常。標(biāo)準(zhǔn)為:1)紅系,計(jì)數(shù)100個(gè)有核紅細(xì)胞,病態(tài)造血為巨幼樣變、核碎裂、核分葉或多核、環(huán)狀鐵粒幼細(xì)胞,胞漿空泡;2)粒系,計(jì)數(shù)100個(gè)中性粒細(xì)胞,病態(tài)造血為胞漿顆粒減少、假Pelger-Hu?t 異常和過(guò)分葉核細(xì)胞;3)巨核系,瑞-吉染色骨髓涂片計(jì)數(shù)至少25個(gè)巨核細(xì)胞,病態(tài)造血為小巨核細(xì)胞、單葉核或多核巨核細(xì)胞。AML 伴有多系發(fā)育異常的診斷標(biāo)準(zhǔn)為至少兩系≥50%的細(xì)胞有病態(tài)造血。應(yīng)用流式細(xì)胞儀免疫表型檢測(cè)協(xié)助診斷分型。

1.3染色體核型分析

取患者骨髓,經(jīng)1640培養(yǎng)基24h培養(yǎng)后,用秋水仙酰胺阻留中期分裂相,收集有絲分裂象細(xì)胞常規(guī)制片,經(jīng)過(guò)R顯帶及吉姆薩染色,根據(jù)細(xì)胞遺傳學(xué)國(guó)際命名體制(ISCN,1995)識(shí)別和描述[3]。

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1.4融合基因檢測(cè)

用RT-PCR法檢測(cè)AML1-ETOPM,L-RARα和CBFB- MYH11,具體方法見(jiàn)文獻(xiàn)[5]。

1.5治療

M3誘導(dǎo)治療采用全反式維甲酸或全反式維甲酸加三氧化二砷雙誘導(dǎo)治療,其余均采用標(biāo)準(zhǔn)劑量的DA方案聯(lián)合方案治療,年齡>60歲患者應(yīng)用CAG或HAG方案化療[6]。

1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件包,行χ2檢驗(yàn)。

2結(jié)果

(1)本系列分析的AML共有107例,按WHO分型構(gòu)成比為:AML伴有重現(xiàn)染色體異常占33.6%(36例),AML伴有多系發(fā)育異常占22.4%(24例),無(wú)治療相關(guān)性AML,AML不另做分類占43.0%(47例)?；颊甙碬HO分型各亞型構(gòu)成比及化療完全緩解比率見(jiàn)表1。

(2)AML伴t(8;21)/AML1-ETO共9例,按國(guó)內(nèi)AML標(biāo)準(zhǔn)確診的M2b 5例,余為M2a 4例;AML伴inv(16)(p13q22)或t(16;16)(p13;q22)/CBFB-MYH11與M4Eo 的吻合率為100%;AML 伴t(15;17)/PML-RARα25例,其中誘導(dǎo)治療一療程后達(dá)CR 23例(92%),未緩解2例,其中1例患者出現(xiàn)心梗、另1例心功能不全難以耐受治療。無(wú)一例11q23異常。

(3)24例AML伴有多系增生異?；颊?男∶女比例為16∶8,繼發(fā)于MDS伴有多系病態(tài)血AML 22例,無(wú)先期MDS伴有多系病態(tài)造血AML 2例。這類患者骨髓原始細(xì)胞比例(中位數(shù)為28.97%)明顯低于無(wú)病態(tài)造血的AML(P

(4)3例患者出現(xiàn)t(9;22)(q34;q11)核型,分別為:2例M4,其中之一為慢性粒細(xì)胞白血病轉(zhuǎn)化而來(lái),應(yīng)用DA方案化療未緩解,另1例給予化療后緩解,不久即復(fù)發(fā);1例M6應(yīng)用化療效果差,未緩解。

(5)AML伴t(8;21)和AML 伴inv(16)或t(16;16)患者的誘導(dǎo)化療CR 率81.8%,顯著高于不另做分類的AML患者46.8%(P

(6)有多系增生異?；颊叩恼T導(dǎo)化療CR 率20.8%,明顯低于無(wú)多系增生異?；颊?5.1%(P

(7)染色體核型低?；颊呋烠R率88.9%,顯著高于染色體核型高危患者26.7%(P

3討論

急性白血病FAB 形態(tài)學(xué)分型因其對(duì)實(shí)驗(yàn)室條件要求不高,得到廣泛應(yīng)用,但該分型存在諸多不足,特別是未將判斷AML預(yù)后的染色體異?？紤]在內(nèi)。2001年的WHO造血組織和淋巴組織腫瘤分類方案對(duì)AML的診斷作了修改:外周血或骨髓原始細(xì)胞≥20%可診斷為AML。當(dāng)患者被證實(shí)有克隆性重現(xiàn)性細(xì)胞遺傳學(xué)異常時(shí),即使原始細(xì)胞

我們的數(shù)據(jù)來(lái)源于一組新發(fā)急性髓系白血病,經(jīng)過(guò)較長(zhǎng)時(shí)間的隨訪,顯示了一些在診斷時(shí)發(fā)現(xiàn)的特異細(xì)胞遺傳學(xué)改變能預(yù)示治療結(jié)果。這個(gè)研究包括一群相對(duì)同質(zhì)的新發(fā)急性髓系白血病患者,他們接受了類似的誘導(dǎo)化療。本系列提示W(wǎng)HO分型的AML伴inv(16)(p13q22)或t(16;16)(p13;q22)/CBFB-MYH11與FAB分型的M4Eo 的吻合率為100.0%,常規(guī)染色體核型難以識(shí)別inv(16),所查2例M4Eo染色體核型為47,XY,+22[6]/48,XY,+8,+22[5]及46,XY,-7,+der(7)[1]/46,XY,N[8],但CBFB-MYH11融合基因均陽(yáng)性支持診斷,且其中1例有+22,相關(guān)研究提示+22與inv(16)相關(guān)[7]。本研究中伴t(15;17)/PML -RARα患者所占AML比例為23.4%,與根據(jù)染色體核型進(jìn)行分析的大系列[8]的比例相似。本研究無(wú)一例11q23 異常,與Schoch 等[9]發(fā)現(xiàn)不一致,可能是收治患者及所分析病例數(shù)相對(duì)偏少所帶來(lái)的偏差。有多系發(fā)育異常AML的比例基本與文獻(xiàn)[8]報(bào)道一致,該亞型從近期療效來(lái)看明顯差于其他亞型,特別是此前有MDS病史者,第1療程CR率僅為18%,相對(duì)于無(wú)多系增生異?；颊?其患者年齡大,重要臟器功能差,化療的耐受性差,化療后骨髓抑制期長(zhǎng),并發(fā)癥多。本系列治療相關(guān)性AML 比例明顯低于文獻(xiàn)報(bào)道[8],可能與我國(guó)腫瘤現(xiàn)代聯(lián)合化療開(kāi)展較西方國(guó)家晚且普及程度較差有關(guān)。3例患者出現(xiàn)t(9;22)(q34;q11)核型,治療預(yù)后差,與NCCN 2009 AML臨床指南將t(9;22)列為高危的細(xì)胞遺傳學(xué)指標(biāo)相符和。

盡管本系列中收治患者及所分析病例數(shù)相對(duì)偏少,AML伴11q23/MLL、有多系發(fā)育異常AML和治療相關(guān)性AML病例數(shù)較少,且隨訪時(shí)間較短,尚不能進(jìn)行各亞型之間的長(zhǎng)期生存的比較,但現(xiàn)有分析結(jié)果表明,AML的WHO分型各亞型的一致性及與臨床療效相關(guān)性好,主要是由于細(xì)胞遺傳學(xué)是預(yù)測(cè)急性髓系白血病達(dá)到CR最有用的因子之一,而細(xì)胞遺傳學(xué)在WHO分型中占重要地位[10]。

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篇5

【關(guān)鍵詞】自然流產(chǎn);染色體;倒位;平衡易位

自然流產(chǎn)是婦產(chǎn)科臨床最常見(jiàn)疾病之一,嚴(yán)重影響患者夫婦的身心健康，病因復(fù)雜，如子宮畸形、子宮內(nèi)膜感染、染色體異常、精神因素、內(nèi)分泌異常等。近年來(lái)由于細(xì)胞遺傳學(xué)的進(jìn)步,發(fā)現(xiàn)染色體異常是自然流產(chǎn)的重要原因之一,本研究對(duì)25對(duì)反復(fù)流產(chǎn)夫婦的染色體進(jìn)行了分析,并結(jié)合有關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行探討。

1 對(duì)象與方法

1．1 研究對(duì)象 2006-2007年,兩年以來(lái)進(jìn)行外周血染色體分析的25對(duì)夫婦,他們均有2次或2 次以上妊娠3 個(gè)月以內(nèi)的自然流產(chǎn)史,對(duì)流產(chǎn)原因均未作過(guò)系統(tǒng)的檢查。

2．1 方法 采集患者外周血進(jìn)行淋巴細(xì)胞培養(yǎng),按常規(guī)方法收獲細(xì)胞,制片,G顯帶觀察,對(duì)受檢者每例核型計(jì)數(shù)30~90,分析核型8~20 個(gè)進(jìn)行核型分析,并進(jìn)行攝影剪貼、保存。

2 結(jié)果

檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)7例異常染色體,占受檢人數(shù)的28%，檢出倒位、易位攜帶者5例,其中男2例，女3例。 占異常核型總數(shù)的71．4%。

案例1 患者，男，33歲，婚后10年，其配偶第一胎足月男嬰，智力正常，發(fā)育良好，第二胎因計(jì)劃生育行中孕期引產(chǎn)，第3、4、5胎均無(wú)原因自然流產(chǎn)。染色體核型分析結(jié)果:46，XY，t(10；20)(10pter10q26::20q13．120qter;20pter20q13．1::10q2610qter)，配偶核型46，XX。男孩核型同父。

患者，女，31歲，婚后7年，妊娠5胎均自然流產(chǎn)。核型分析結(jié)果:46，XX/46,XX,t(1；15)(1qter1p36::15q2215qter;15pter15q22::1p361pter)，異常核型占83．33%，正常核型占14．17%。

案例1 2患者，女，26歲，G4P1，第1、3、4胎無(wú)原因自然流產(chǎn)，第二胎足月分娩一男嬰為先天癡呆兒，8個(gè)月后死亡。染色體核型分析結(jié)果:46,XX,16qh+。家庭成員中父與小妹核型與例3相同，G顯帶標(biāo)本分析:測(cè)量5個(gè)核型的16 h+號(hào)染色體結(jié)構(gòu)異染色質(zhì)，計(jì)算結(jié)果，16q+異染色質(zhì)為正常染色體的異染色質(zhì)的2倍。

案例1 3患者，女，27歲，婚后5年自然流產(chǎn)3胎，核型分析結(jié)果:45，XX,t(13;13)(q11;q11)。

案例1 4患者，男，25歲，婚后5年，其配偶妊娠5胎均不明原因自然流產(chǎn)，染色體核型分析結(jié)果:45，XY,t(13;14)(q11;q11)。

3 討論

染色體異常是不良生育的重要原因之一,在自然流產(chǎn)夫婦中占3%~10%，而引起自然流產(chǎn)的染色體異常以平衡易位最為常見(jiàn),本文倒位，易位5例,占染色體異常的71．4%,占受檢總?cè)藬?shù)的20%,說(shuō)明倒位，易位是引起自然流產(chǎn)的重要細(xì)胞遺傳學(xué)病因。 平衡易位源自染色體斷裂與易位重接,包括相互易位、羅伯遜易位、整臂易位等類型。不同類型易位攜帶者,其臨床表現(xiàn)不一致[1]。根據(jù)經(jīng)典遺傳學(xué)規(guī)律,平衡易位攜帶者理論上可形成18種類型配子。當(dāng)其與正常配子結(jié)合,則可形成18種類型合子。除其中1種正常,1種為表型正常的易位攜帶者外,其余16種,因遺傳物質(zhì)的不平衡(丟失或重復(fù)),均導(dǎo)致胚胎停止發(fā)育而流產(chǎn),或分娩低能兒、畸形兒。平衡易位攜帶者染色體保留了原有基因總數(shù),只發(fā)生了基因在染色體上相對(duì)位置的變化,對(duì)基因的作用和個(gè)體發(fā)育一般無(wú)嚴(yán)重影響,但是生殖細(xì)胞經(jīng)過(guò)減數(shù)分裂過(guò)程中的聯(lián)合和互換可產(chǎn)生各種不平衡重排配子,造成遺傳物質(zhì)的增加或減少。平衡易位攜帶者在成年前常不易被發(fā)現(xiàn),而且表型正常,但是與正常人結(jié)婚生育子女,其后代可以從親代接受一條易位型(重新排列)衍生染色體和1條正常染色體,其余大部分都是單體或三體,造成基因的缺失或多余,從而破壞了基因的平衡,引起胎兒畸形或反復(fù)流產(chǎn)等[2]。

一般而言,染色體倒位片段越短,產(chǎn)生不平衡配子的重復(fù)或缺失的部分越大,其配子和合子正常發(fā)育的可能性越低,臨床上表現(xiàn)的婚后不育,月經(jīng)期延長(zhǎng),早期流產(chǎn)及胚胎停育的比例越高,娩出畸形兒的可能性越低;若倒位片段越長(zhǎng),則重復(fù)和缺失的部分越短,其配子與合子正常發(fā)育的可能性越大,娩出畸形兒的可能性越高。關(guān)于大Y和小Y與自然流產(chǎn)的關(guān)系,各學(xué)者說(shuō)法不一。有很多學(xué)者認(rèn)為Y染色體長(zhǎng)臂上的長(zhǎng)短變化是一種正常變異,無(wú)臨床意義。但有文獻(xiàn)報(bào)道，Y染色體長(zhǎng)臂異染色質(zhì)區(qū)延長(zhǎng)或短缺,能導(dǎo)致發(fā)生障礙。也有學(xué)者認(rèn)為Y染色體是異染色質(zhì)DNA過(guò)度復(fù)制所致,這些重復(fù)的DNA可能使有絲分裂發(fā)生錯(cuò)誤或干擾基因調(diào)節(jié),通過(guò)影響Y染色體上的產(chǎn)生或其他相關(guān)基因的表達(dá)或調(diào)控,使其產(chǎn)生形態(tài)異常的頻率增加,從而導(dǎo)致畸精癥,其配偶有較高頻率的反復(fù)流產(chǎn)或死胎。

例1即屬于平衡易位攜帶者，致使配偶流產(chǎn)三胎，其表型正常的兒子從父親那里得到一異位的10號(hào)與20號(hào)染色體，個(gè)體總基因保持平衡，所以表型正常，這又是一個(gè)平衡易位攜帶者。例2核型中，平衡易位嵌合體的形成是由于發(fā)生在合子卵裂期的四細(xì)胞時(shí)期，與卵子正常受精形成正常的受精卵，受精卵第一次分裂為兩個(gè)正常體細(xì)胞，其中一個(gè)體細(xì)胞正常分裂，其片段發(fā)生交換，這種交換便形成46XX,t(1;15)(p36;q22)核型，細(xì)胞繼續(xù)分裂形成該細(xì)胞系，從而體現(xiàn)個(gè)體既有平衡易位核型，亦有正常細(xì)胞核型。

人類染色體的多態(tài)性表現(xiàn)在結(jié)構(gòu)異常的染色質(zhì)的數(shù)量與位置的改變。我院發(fā)現(xiàn)一例16號(hào)染色體另一種新變異型，即16qh+,G顯帶中可見(jiàn)其中一條16號(hào)染色體，q11與q12帶之間增添一條窄淺色帶和一條深帶，深帶著色同q11,異常16號(hào)明顯比另一條增長(zhǎng)。核型中其他染色體均無(wú)缺失，在G帶標(biāo)本中16qh+結(jié)構(gòu)異染色質(zhì)為正常16號(hào)染色體q的異染色質(zhì)的二倍，故16ph+G帶中增多的兩條帶紋即是結(jié)構(gòu)異染色質(zhì)。一般認(rèn)為，這種結(jié)構(gòu)異染色質(zhì)的多態(tài)性在一個(gè)個(gè)體內(nèi)是一種穩(wěn)定的特性。案例3中，父親與小妹表型均正常，說(shuō)明這種多態(tài)性可能不影響機(jī)體正常發(fā)育，另根據(jù)報(bào)道這種變異型與流產(chǎn)和先天畸形有關(guān)[3]。該例患者第1、3、4胎均流產(chǎn)，第2胎分娩先天癡呆患兒，其父雖為16qh+，但其母無(wú)異常孕產(chǎn)史，所以這種多態(tài)現(xiàn)象臨床意義有待進(jìn)一步研究。

案例4為同源染色體羅賓孫易位攜帶者通過(guò)減數(shù)分裂所產(chǎn)生的配子其相應(yīng)的染色體增多或缺失一條，即是與正常配子結(jié)合，也將形成相應(yīng)的染色體三體型或單體型是關(guān)鍵，胚胎體形成建立及基本器官形成期，細(xì)胞由分子水平的化學(xué)變化引起明顯的形態(tài)變化，體節(jié)變化，顏面形成，肢芽及感官出現(xiàn)，主要器官系統(tǒng)的原基初步建立，腦、心臟、肝、四肢、耳鼻及眼等結(jié)構(gòu)形成，使胚胎變成具有人類形態(tài)特征，第三期胎兒期，在卵受精后的9~40周，此期胎兒迅速生長(zhǎng)，功能建立，由此說(shuō)明，夫婦雙方有一方染色體異常如平衡異位，其配子就有可能產(chǎn)生大片段缺失的畸形，此種受精卵絕大多數(shù)不能完成正常胚胎發(fā)育，而在胚胎期導(dǎo)致死亡，故孕早期，因染色體畸變致流產(chǎn)的概率最高[4]。

案例5為男性非同源染色體RT攜帶者，RT是男性不育的一個(gè)原因，本例患者由于配子異常致愛(ài)人流產(chǎn)5胎，非同源染色體RT者也可有正常配子與正常異性配子結(jié)合形成正常合子[5]，其配偶妊娠應(yīng)該做產(chǎn)前檢查。

所以,對(duì)不明原因先兆流產(chǎn)的孕婦應(yīng)勸其終止妊娠,自然流產(chǎn)是檢出染色體平衡易位攜帶者的重要臨床指征。對(duì)自然流產(chǎn)夫婦進(jìn)行細(xì)胞遺傳學(xué)檢查,不僅可以明確其流產(chǎn)的原因,還可通過(guò)家系調(diào)查檢出攜帶者,并對(duì)其婚姻生育進(jìn)行咨詢和指導(dǎo)[6]。若女方為同源染色體羅氏易位攜帶者，應(yīng)勸其終生避孕或?qū)嵤┙^育術(shù)，若男方為同源染色體羅氏易位或易位攜帶者，應(yīng)對(duì)女方進(jìn)行人工授精，對(duì)其他染色體異?；驍y帶者再次妊娠后14~20周抽羊水進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，制備染色體標(biāo)本進(jìn)行分析，以確認(rèn)胚胎胎兒的棄留，從而預(yù)防染色體異常患兒的出生。因此,細(xì)胞遺傳學(xué)檢查對(duì)優(yōu)生優(yōu)育有著重要的意義。

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篇6

PGD技術(shù)是以體外受精――胚胎移植技術(shù)（IVF-ET）為基礎(chǔ)，結(jié)合顯微操作技術(shù)與單細(xì)胞遺傳學(xué)分析技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)。理論上講，只要能夠確定疾病的致病基因，有足夠的序列信息，凡是能夠被診斷的遺傳病都能通過(guò)PGD來(lái)防止患兒的出生。目前已開(kāi)展的十幾種疾病的診斷有：1、性連鎖疾病的診斷：如血友病、色盲等；2、單基因病的診斷：如囊性纖維病、鐮形細(xì)胞貧血癥、地中海貧血癥、杜氏肌營(yíng)養(yǎng)不良癥、脆性X綜合癥等；3、染色體病的診斷：包括染色體數(shù)目異常，如高齡婦女的非整倍體檢測(cè)、18-三體、21-三體等，染色體結(jié)構(gòu)異常，如羅氏易位等。

根據(jù)進(jìn)行胚胎種植前遺傳學(xué)診斷的時(shí)間，可分為配子期、卵裂球期與囊胚期PGD。

1、配子期活檢：對(duì)于卵子可進(jìn)行第一極體、第二極體的活檢，分析其核型，從而提供母系方面的遺傳檢測(cè)，適用于容易發(fā)生染色體不分離的高齡婦女，但對(duì)于雜合子來(lái)說(shuō)，由于同源染色體互換，無(wú)法從極體基因推測(cè)卵子基因型。

2、卵裂球活檢：通常選用6-8細(xì)胞的胚胎，取1-2個(gè)卵裂球進(jìn)行活檢，不會(huì)影響胚胎的發(fā)育，是目前常用的方法。

3、囊胚期活檢：從內(nèi)細(xì)胞團(tuán)的對(duì)側(cè)取滋養(yǎng)外胚層細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè)，不會(huì)影響胚體的發(fā)育，且可以提供相對(duì)較多的細(xì)胞數(shù)目，缺點(diǎn)是發(fā)育至囊胚期的胚胎較少，且受培養(yǎng)條件的限制，不易為遺傳學(xué)分析提供足夠的時(shí)間。

胚胎卵裂球的獲取方法有三種，可采用機(jī)械法、噴酸法或激光法，在透明帶上打孔，吸取極體、卵裂球或滋養(yǎng)層細(xì)胞。

單細(xì)胞的遺傳學(xué)分析：染色體病與性連鎖疾病的診斷通常采用熒光原位雜交法（FISH），單基因病采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)法（PCR）。

目前PGD技術(shù)在全球范圍內(nèi)已得到廣泛應(yīng)用。世界上第一個(gè)PGD嬰兒于1990年在英國(guó)誕生。至2001年，全世紀(jì)已有1561對(duì)夫婦進(jìn)行了2879個(gè)PGD周期，誕生了279個(gè)嬰兒。目前在全世紀(jì)已有50多個(gè)PGD的診斷中心，我國(guó)也有8個(gè)生殖中心從事PGD的研究。

PGD技術(shù)的適用范圍主要針對(duì)有高風(fēng)險(xiǎn)生育性連鎖隱性遺傳病、基因病和染色體病后代的夫婦，其次在IVF中優(yōu)選胚胎以及其它方面的應(yīng)用。實(shí)施PGD不僅可提供遺傳學(xué)檢測(cè)(如檢查染色體組型、Y染色體微缺失等)，還可對(duì)有遺傳基因異常的不孕夫婦進(jìn)行輔導(dǎo)，同時(shí)提出相應(yīng)的對(duì)策，例如利用種植前遺傳學(xué)診斷(PGD)為他們篩選出沒(méi)有遺傳父母基因缺陷的胚胎作移植之用等，還可利用PGD為可能生產(chǎn)地中海貧血患兒的夫婦篩選出正常的胚胎，讓他們避免因胎兒患病而承受墮胎之痛。

大量的實(shí)驗(yàn)研究和臨床觀察均證明早期胚胎活檢并不影響其分化和發(fā)育，出生后也未發(fā)現(xiàn)異常，初步證明了PGD的安全性。隨著遺傳診斷技術(shù)的進(jìn)展，在不遠(yuǎn)的將來(lái)PGD將成為一種常規(guī)的孕前診斷篩查技術(shù)。

世界衛(wèi)生組織(WHO)在討論婦女生殖健康時(shí)提到，婦女應(yīng)能享有滿意和安全的性生活；能生育，且能決定何時(shí)生、生多少；能得到適當(dāng)?shù)尼t(yī)療照顧，使她們能順利地懷孕、分娩，使夫婦們能有最大的機(jī)會(huì)獲得健康的嬰孩。這也是我們的努力方向――我們既努力提高不孕夫婦懷孕的機(jī)會(huì)，也努力避免妊娠、分娩的并發(fā)癥(如避免懷多胞胎等)，避免孩子出現(xiàn)嚴(yán)重的遺傳性疾病(如利用種植前遺傳學(xué)診斷(PGD)為遺傳基因異常的不孕夫婦挑選沒(méi)有患病的胚胎等)；同時(shí)協(xié)助他們以平常心面對(duì)不孕(如通過(guò)心理輔導(dǎo)活動(dòng))，盡量減輕不孕及不孕治療對(duì)他們生活質(zhì)素的影響。

篇7

隨著生活水平的不斷提高和科技的不斷進(jìn)步，社會(huì)趨向老齡化，急性白血病的發(fā)病率逐年增加，老年人急性白血病（AL）也成為臨床診治中毋容忽視的一個(gè)群體?，F(xiàn)將我院2009年1月1日～2013年3月30收治的57例初治老年AL患者的臨床資料進(jìn)行分析，現(xiàn)報(bào)告如下：

1 材料與方法

1.1 一般資料 57例住院病人，男26例，女31例，男：女為1：1.19，發(fā)病年齡60～80歲，中位年齡67.08歲。全部病例均經(jīng)血象、骨髓象、組織化學(xué)染色確診，部分病例行免疫學(xué)及細(xì)胞遺傳學(xué)檢查，均符合急性白血病分型及診斷標(biāo)準(zhǔn)（1）。

1.2 AL類型 形態(tài)學(xué)分型：AML 45例，M1 1 例，M2 23 例，M3 2 例，M4 10 例，M5 8例，M6（原發(fā)性） 1 例；ALL 12例，L1 3 例，L2 5例，L（形態(tài)未分類） 4 例，ALL：AML為1：3.75 。免疫學(xué)分型：54例做流式分型，表達(dá)髓系標(biāo)志者45例，表達(dá)淋巴系標(biāo)志者7例，同時(shí)表達(dá)髓系及淋巴系標(biāo)志者2例，表達(dá)CD34+細(xì)胞20例。細(xì)胞遺傳學(xué)分型：25例做染色體核型分析，其中16例有染色體核型異常，包括t（15；17）2例，t（8；21）7例，t（8；14）2例，t（4；11）4例，+8三體1例。

1.3 臨床表現(xiàn) 貧血52例（91.2%），發(fā)熱18例（31.5%），皮膚粘膜出血點(diǎn)及瘀斑、齒齦出血、鼻出血、腦出血共11例（19.2%），胸骨壓痛32例（56.1%），骨痛9例（15.8%），淋巴結(jié)腫大6例（10.5%），肝大4例（7%），脾大3例（5.2%），雙下肢浮腫4例（7%）。

1.4 化驗(yàn)室檢查 外周血：WBC

1.5 合并癥 合并糖尿病4例（7%），肺部感染5例（8.8%），腦出血2例（3.5%），銀屑病、冠心病、肺心病、慢性腎功能不全、腸梗阻各1例，高血壓病3例（5.2%）。

2 治療與轉(zhuǎn)歸

2.1 誘導(dǎo)緩解治療 AML中 12例用HA方案（HHT 2-4mg/d ×5-7d，Ara-C 100-200mg/d×5-7d），6 例用DA方案（DNR 40-60mg/d× 3d，Ara-C 100-200mg/d ×5-7d），4例用CAG方案（阿克拉霉素5-7mg/d ×1-8d，Ara-C 10mg/ m2 q12h×1-14d，G-CSF 200ug/ m2 ×0-14d），7例用HAG方案（HHT 2-4mg/d ×5-7d，Ara-C 25mg/m2 q12h d1-14，G-CSF 200ug/ m2 ），2例用HOAP方案（HHT 2-4mg/d ×5-7d，VCR 2mg/d d1，Ara-C 100-200mg/d×5-7d，Pred 45-60mg/d×5-7d ），4例用IA方案（IDA10mg/d×3d，Ara-C 100-200mg/d ×5-7d），1例用TA方案（THP 40mg/d×3d，Ara-C 100-200mg/d ×5-7d ），1例用全反式維甲酸（40-60mg/d）聯(lián)合DA方案治療； ALL中5 例用VDLP方案（VDS 4mg/d d1.8.15.22，DNR 40-60mg/d d1-3 15-17，L-Asp10000u ×6 d，Pred 45-60mg/d，第15天后減量）， 3例用CODP方案（CTX 0.2-0.6/d d2.5，VDS 4mg/d d1.8.15.22，DNR 40-60mg/d d1-3，d15-17，Pred 45-60mg/d，第15天后減量）。2例用COP方案（CTX 0.2 d1.3，VDS 4mg/d1.8，Dex 10mg/d×8d），1例用COAP方案（CTX 0.2-0.6/d d2.5，VDS 4mg/d，d1.8.15.22，Ara-C 100mg/d×5-7d）。1例用MOEP方案（MTZ 5mg/d×3d，VDS 4mg/d d1，VP-16 0.1/d×3d，Dex7.5mg/d×7d）。

2.2 支持治療：留置深靜脈導(dǎo)管，保證治療順利進(jìn)行?；熎陂g給予水化、堿化尿液、止吐，保護(hù)重要臟器功能。根據(jù)病情給予成分輸血、抗感染及G-CSF治療。

2.3 并發(fā)癥 均出現(xiàn)骨髓抑制，并發(fā)口腔、上呼吸道、肺部、消化道、肛周、皮膚感染者共32例；出血21例，其中皮膚黏膜出血15例，消化道出血2例，牙齦出血2例，泌尿系出血2例；腫瘤溶解綜合癥1例。

2.4 轉(zhuǎn)歸 9例未化療自動(dòng)出院，8例姑息治療， 1例M3患者口服全反式維甲酸治療，以上幾種情況均不計(jì)入療效評(píng)價(jià)〔2〕。39例接受化療，10.2%（4/39）治療失敗，9例在化療第一療程后達(dá)完全緩解（CR），CR率23%（9/39）。12例達(dá)部分緩解（PR），PR率30.7%（12/40）?？傆行蕿?3.8%（21/39）。死亡8例，20.5%（8/39）的死亡與化療直接相關(guān)。WBC>100×109，CD34+細(xì)胞陽(yáng)性，t（4；11）的患者無(wú)1例達(dá)CR，SF增高的患者3 例達(dá)CR，LDH增高的患者3例達(dá)CR， 60-69歲患者CR 7 例，占77.7%（7/9）。

3 討論

老年人白血病初起臨床癥狀不典型，易被高齡體質(zhì)所掩蓋，容易誤診漏診。本資料統(tǒng)計(jì)約38.5%（22/57）的患者就診時(shí)就出現(xiàn)髓外白血病細(xì)胞浸潤(rùn)的表現(xiàn)，因此，老年人定期進(jìn)行常規(guī)體格有利于疾病的早期發(fā)現(xiàn)與診治。

本資料共統(tǒng)計(jì)57例老年初治AL，其中AML45例，M2占51.1%（23/45），患者多伴有糖尿病、肺部感染、高血壓等基礎(chǔ)疾病，常有貧血、發(fā)熱、出血等癥狀。本組接受化療的患者以HAG、IA、VDLP方案緩解率較高，HAG方案緩解6例，CR率85.7%（6/7），IA方案緩解3例，CR率75%（3/4），DA方案緩解4例，CR率66%（4/6），IA方案誘導(dǎo)緩解優(yōu)于DA方案，20.5%的死亡與化療直接相關(guān)。VDLP方案緩解4例，CR率80%（4/5）.

Haferlach等[3]通過(guò)多中心研究分析認(rèn)為細(xì)胞遺傳學(xué)、年齡、高LHD水平與預(yù)后相關(guān)。本資料統(tǒng)計(jì)顯示高白細(xì)胞（≥100×109）者占12.2%（7/57），骨髓明顯活躍以上占38.5%（22/57），LDH升高占50.8%（29/57），SF升高者占61.4%（35/57），免疫學(xué)表型：CD34+細(xì)胞陽(yáng)性者占35.0%（20/57），染色體核型異常者占64.0%（16/25）。上述患者均有極低的CR率。本資料統(tǒng)計(jì)CR率為23%與文獻(xiàn)[4-7]報(bào)道的25.6%-47.6%相接近。老年AL緩解率低的原因?yàn)椋孩俸喜⑿哪X腎等重要臟器功能損害，對(duì)化療藥物清除緩慢②既往有前驅(qū)血液病病史，如MDS [6]。③化療后抵抗力低，易并發(fā)嚴(yán)重感染，出血，病死率高。④多藥耐藥基因MDR1及p-糖蛋白（p-pg）高表達(dá) [7]。

對(duì)于老年AL的治療，各家都有報(bào)道，但迄今尚無(wú)公認(rèn)的有效治療方案。我科應(yīng)用HAG方案治療初治老年AL7例，其中緩解6例，CR率85.7%（6/7），CAG方案治療4例，3例達(dá)CR，CR率75%，鑒于觀察例數(shù)較少，無(wú)法正確評(píng)估其療效，關(guān)于CAG、HAG方案治療初治老年AL的確切療效有待于大樣本資料進(jìn)一步觀察。

總之，老年AL有其獨(dú)特的生物學(xué)特性及自身特點(diǎn)，治療應(yīng)個(gè)體化，有必要進(jìn)一步研究及探索更合理的治療方案。

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篇8

【關(guān)鍵詞】 骨髓涂片； 骨髓活檢； 再生障礙性貧血； 診斷

中圖分類號(hào) R556.5 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 B 文章編號(hào) 1674-6805（2015）22-0080-02

doi：10.14033/ki.cfmr.2015.22.043

再生障礙性貧血（aplastic anemia，AA）是由物理、化學(xué)、生物因素或不明原因引起的一種獲得性骨髓造血功能衰竭癥，主要表現(xiàn)為骨髓造血細(xì)胞增生低下、全血細(xì)胞減少，以及貧血、感染、出血，抑制細(xì)胞免疫治療有效[1]。目前國(guó)際上常用診斷標(biāo)準(zhǔn)為Cammita標(biāo)準(zhǔn)，而國(guó)內(nèi)一般使用的則是基于Cammita標(biāo)準(zhǔn)及Baciglupo超重型AA標(biāo)準(zhǔn)而制定的改良診斷標(biāo)準(zhǔn)。這些標(biāo)準(zhǔn)均是以形態(tài)學(xué)為診斷基礎(chǔ)[2]。故筆者著眼于骨髓涂片及骨髓活檢對(duì)AA疾病特點(diǎn)進(jìn)行比較分析，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

病例檢索2011年10月-2014年12月筆者所在醫(yī)院360例血細(xì)胞減少（單系、二系或三系）患者資料，對(duì)診斷為AA患者的資料進(jìn)行分析，AA的診斷標(biāo)準(zhǔn)參照張之南等[3]主編的血液病診斷及療效標(biāo)準(zhǔn)。收集23例AA患者，其中男13例，女10例，年齡3～60歲，初診時(shí)的臨床資料：血細(xì)胞計(jì)數(shù)、網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)以及骨髓涂片細(xì)胞學(xué)檢查和骨髓活檢結(jié)果。

1.2 方法

（1）骨髓涂片檢查：用骨穿針于胸骨取材，骨穿針固定于骨面后，拔出針芯，接干燥注射器，取0.2 ml骨髓液涂片，行瑞氏染色后進(jìn)行觀察。（2）骨髓活檢檢查：用國(guó)產(chǎn)B65201骨髓活檢針，取材于髂后上棘，環(huán)鉆法切取骨髓組織2 cm，4%甲醛固定2 h，2%硝酸脫鈣，石蠟包埋，3 μm厚切片，常規(guī)HE染色，另切取5 μm厚切片，行Gomori網(wǎng)狀纖維染色。（3）染色體核型分析：肝素抗凝4 ml骨髓標(biāo)本，有核細(xì)胞計(jì)數(shù)后按2×106/ml細(xì)胞密度接種于含20%胎牛血清的RPMI 1640培養(yǎng)基中，37 ℃培養(yǎng)24 h，加秋水仙堿作用1 h，經(jīng)低滲、預(yù)固定、固定液制成細(xì)胞懸液，制片R顯帶染色，根據(jù)《人類細(xì)胞遺傳學(xué)國(guó)際命名體制（ISCN 1995）》進(jìn)行核型描述。

1.3 觀察指標(biāo)

比較23例AA患者骨髓涂片與骨髓活檢增生程度。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 13.0軟件對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，比較采用字2檢驗(yàn)。P

2 結(jié)果

2.1 一般狀況

23例AA患者中，貧血4例，感染0例，出血4例，貧血+感染1例，貧血+出血8例，感染+出血1例，貧血+感染+出血3例，無(wú)貧血、感染、出血2例。染色體1例未見(jiàn)分裂像，另1例為45，XY，-7，余均正常。

2.2 骨髓涂片細(xì)胞學(xué)檢查、骨髓活檢檢查

23例患者均行骨髓涂片和活檢檢查，結(jié)果顯示23例AA患者骨髓活檢的增生程度均為減低或極度減低，而骨髓涂片顯示明顯活躍2例，活躍6例，減低11例，極度減低4例。骨髓活檢中巨核細(xì)胞數(shù)量，明顯低于其在骨髓涂片中的數(shù)量。詳見(jiàn)表1。

2.3 骨髓涂片與骨髓活檢及兩者聯(lián)合診斷符合率

骨髓活檢對(duì)AA的診斷率明顯高于骨髓涂片（P

3 討論

AA的發(fā)病機(jī)制尚未完全明了，目前趨向于認(rèn)同AA是造血干細(xì)胞減少所致的造血功能衰竭性疾??；亦就細(xì)胞毒性T細(xì)胞攻擊造血干細(xì)胞是AA發(fā)病主要原因已達(dá)成共識(shí)[4]。AA治療一般首選免疫抑制治療（IST）和異基因骨髓/造血干細(xì)胞移植（HSCT）[5]，但就IST而言，臨床效果欠佳，療效僅為70%左右；有研究發(fā)現(xiàn)，疾病診斷誤差可能是一部分原因[6]。除常見(jiàn)的MDS、PNH等疾病外，自身抗體介導(dǎo)的IRP、意義未明的特發(fā)性血細(xì)胞減少癥（IGUS）尤值得關(guān)注[7]。確診的IRP的患者無(wú)須使用抗胸腺細(xì)胞球蛋白（ATG）治療[8]；而IGUS尚不是一種獨(dú)立疾病，可能只是其他血液病的一個(gè)過(guò)渡階段[9]，故血細(xì)胞減少的診斷至關(guān)重要。

筆者所研究的23例AA患者的骨髓涂片檢查結(jié)果中有6例增生程度為活躍、2例為明顯活躍，而恰恰這8例，在骨髓活檢時(shí)增生程度均為減低或極度減低。而2010年版《再生障礙性貧血診斷治療專家共識(shí)》中診斷標(biāo)準(zhǔn)明確指出：骨髓涂片中為多部位（不同平面）骨髓增生減低或明顯減低，骨髓活檢中（髂骨）全切片增生減低；很顯然，結(jié)合巨核細(xì)胞計(jì)數(shù)在骨髓涂片及活檢中的差異，骨髓活檢更能提高AA診斷準(zhǔn)確率[10]。一般認(rèn)為，對(duì)確定造血衰竭的性質(zhì)，骨髓活檢的診斷價(jià)值高于骨髓涂片細(xì)胞學(xué)檢查[11]。尤其當(dāng)臨床上遇到外周血液稀釋、骨髓干抽，此時(shí)，單單骨髓涂片往往難以明確診斷[12]，此時(shí)，骨髓活檢的診斷價(jià)值更高。筆者在診斷時(shí)充分考慮到人體向心性造血的特點(diǎn)――胸骨處骨髓較髂骨處骨髓增生程度更加準(zhǔn)確，所有患者骨髓涂片均取材于胸骨，故比較更加具備說(shuō)服力。

一般認(rèn)為，MDS不僅要有骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)上的病態(tài)造血，更要有單克隆造血的證據(jù)（如染色體的異常），這也是與AA鑒別的重要一點(diǎn)，但尤其值得注意的是少部分AA患者亦存在細(xì)胞遺傳學(xué)克隆異常，如+8、+6、5q-和7號(hào)、13號(hào)染色體異常。筆者亦觀察到一例AA患者染色體結(jié)果為45，XY，-7。劉惠等[10]報(bào)道，這些異?？寺】赡苤皇且贿^(guò)性改變，可以自行消失，但仍然宜定期（3～6個(gè)月）監(jiān)測(cè)，如出現(xiàn)異常分裂像增多，提示疾病可能發(fā)生變化。筆者在積極治療ATG+CSA1個(gè)月后復(fù)查染色體結(jié)果為45，XY，-7/46，XY；同時(shí)行FISH檢查P53缺失，為5/300（

AA診斷務(wù)必謹(jǐn)慎，避免與MDS、IGUS、IRP等混淆，骨髓活檢較骨髓涂片更能有助于AA的診斷在臨床上，根據(jù)骨髓檢查結(jié)果，再有目的地選擇免疫學(xué)、細(xì)胞遺傳學(xué)和分子生物學(xué)方法進(jìn)行深一步的診斷，往往可以取得事半功倍的效果。

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篇9

【關(guān)鍵詞】染色體；異常核型；無(wú)精癥。

【中圖分類號(hào)】R596 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A 【文章編號(hào)】1004-7484（2012）12-0079-01

1 病例資料

患者，男，35歲，第二性征發(fā)育良好?；楹?年半不孕，三次行常規(guī)檢查均未見(jiàn)。既往無(wú)腮腺炎病史。夫婦表型和智力正常，非近親婚配，家系中無(wú)不良孕產(chǎn)史，無(wú)智力低下兒。女方已行染色體檢查，核型為46，XX。

2 高分辨染色體制備

抽取患者外周血，取0.3mL接種于5mL外周血淋巴細(xì)胞培養(yǎng)基中，37℃培養(yǎng)72小時(shí)，加入10-5mol/L Frdu和10-4mol/L Uridine各100?L， 繼續(xù)培養(yǎng)17小時(shí)后加入10-3mol/L TDR100?L，繼續(xù)培養(yǎng)4小時(shí)后加1g/L EB 50?L，45分鐘后加20mg/L秋水仙素35?L，10分鐘后常規(guī)收獲細(xì)胞，滴片，常規(guī)吉姆薩染色，光學(xué)顯微鏡下觀察，并用染色體圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行照相。

3 結(jié)果

隨機(jī)觀察的30個(gè)完整分裂相，分析15個(gè)核型，均為46，XY， der（1）（1pter1q44：：12q1212qter），der（11）（11pter11q13：：12q1112q12：：22p11.222pter），der（12）（12pter12q11：：1q441qter），der（22）（11qter11q13：：22p11.222qter）（見(jiàn)圖1和圖2）。經(jīng)國(guó)家異常核型數(shù)據(jù)庫(kù)查閱所有國(guó)內(nèi)外資料均未見(jiàn)報(bào)道，為世界首報(bào)核型。

4 討論

患者1號(hào)，11號(hào)，12號(hào)和22號(hào)共4條染色體發(fā)生了斷裂和交換，其中12號(hào)染色體發(fā)生了兩處斷裂，分別形成了4條新的衍生染色體。這種畸變屬于相互易位并伴隨插入，屬罕見(jiàn)的染色體結(jié)構(gòu)異常。其形成可能系單倍體的或卵子的染色體以染色質(zhì)絲狀態(tài)散布在細(xì)胞核中，受一次或多次擊中事件影響，導(dǎo)致染色體片段重新組合所致[1]。

經(jīng)高分辨染色體核型分析未發(fā)現(xiàn)染色體區(qū)帶的丟失和重復(fù)，即初步認(rèn)為該患者的遺傳物質(zhì)總量不變，所以對(duì)該個(gè)體自身生長(zhǎng)發(fā)育沒(méi)有造成嚴(yán)重影響。根據(jù)遺傳學(xué)定律[2]，涉及到4條染色體相互易位并伴隨插入的染色體異常核型，理論上產(chǎn)生正常配子的概率微乎其微[3]，因此臨床上認(rèn)為此類患者無(wú)法正常生育下一代，可通過(guò)供精人工授精的方式來(lái)生育。

此患者目前唯一可查的臨床表型為“無(wú)精癥”，但其染色體畸變是否與無(wú)精癥相關(guān)，作者認(rèn)為還有待進(jìn)一步研究。

參考文獻(xiàn)：

[1] 葉志純，趙蕊，祝興元，三條染色體復(fù)雜易位攜帶者的遺傳效應(yīng)分析，中國(guó)優(yōu)生與遺傳雜志， 2005， 13（4）：47-48

篇10

為加強(qiáng)畢業(yè)后醫(yī)學(xué)教育工作的領(lǐng)導(dǎo)，進(jìn)一步促進(jìn)畢業(yè)后醫(yī)學(xué)教育科學(xué)化、規(guī)范化，提高畢業(yè)后醫(yī)學(xué)教育質(zhì)量，逐步建立?？漆t(yī)師培訓(xùn)制度，衛(wèi)生部于2005年12月31日成立畢業(yè)后醫(yī)學(xué)教育委員會(huì)。

衛(wèi)生部畢業(yè)后醫(yī)學(xué)教育委員會(huì)由衛(wèi)生部、有關(guān)部委、部分衛(wèi)生廳（局）、高等學(xué)校、社團(tuán)組織和醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)的代表及專家組成。

衛(wèi)生部畢業(yè)后醫(yī)學(xué)教育委員會(huì)的任務(wù)是在衛(wèi)生部的領(lǐng)導(dǎo)下，對(duì)全國(guó)畢業(yè)后醫(yī)學(xué)教育工作進(jìn)行指導(dǎo)、協(xié)調(diào)和管理；開(kāi)展全國(guó)畢業(yè)后醫(yī)學(xué)教育政策的研究；擬定全國(guó)畢業(yè)后醫(yī)學(xué)教育規(guī)劃和管理辦法，并組織實(shí)施。

衛(wèi)生部畢業(yè)后醫(yī)學(xué)教育委員會(huì)下設(shè)辦公室，執(zhí)行委員會(huì)決議，落實(shí)委員會(huì)確定的各項(xiàng)工作，處理日常事務(wù)。辦公室設(shè)在衛(wèi)生部科教司。

為促進(jìn)檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)的發(fā)展，推動(dòng)我國(guó)血液學(xué)、體液學(xué)及臨床輸血水平的提高，加強(qiáng)檢驗(yàn)與臨床的結(jié)合，擴(kuò)大對(duì)教學(xué)、科研、臨床醫(yī)學(xué)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)之間的相互交流，由中華醫(yī)學(xué)會(huì)檢驗(yàn)分會(huì)主辦、湖北省醫(yī)學(xué)會(huì)承辦的全國(guó)“血液學(xué)、體液學(xué)、輸血學(xué)”學(xué)術(shù)會(huì)議將于2006年4月中下旬在美麗的東湖之濱――武漢科技會(huì)展中心舉行。

大會(huì)將邀請(qǐng)血液學(xué)、體液學(xué)、血栓與止血、輸血等著名專家做專題學(xué)術(shù)報(bào)告，并從會(huì)議投稿論文中遴選出優(yōu)秀論文進(jìn)行大會(huì)專題學(xué)術(shù)交流。錄取論文的參會(huì)代表可獲得論文證書(shū)，所有參加會(huì)議的代表可獲得國(guó)家級(jí)繼續(xù)醫(yī)學(xué)教育學(xué)分。 學(xué)術(shù)會(huì)議征文要求

（一） 征文領(lǐng)域

血液學(xué)檢驗(yàn) 體液學(xué)檢驗(yàn) 血栓與止血

臨床輸血 基因診斷 質(zhì)量管理

實(shí)驗(yàn)室管理與認(rèn)可

（二） 征文的主要內(nèi)容范圍

1．血液學(xué)檢驗(yàn)

常規(guī)檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)化及質(zhì)量控制

新的檢測(cè)方法及指標(biāo)在血常規(guī)檢測(cè)中的應(yīng)用

血細(xì)胞鏡檢規(guī)則的制定及應(yīng)用、存在的問(wèn)題與對(duì)策

骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查質(zhì)量管理

貧血與白血病的形態(tài)學(xué)特征

關(guān)于血液病的基礎(chǔ)研究

2．體液學(xué)檢驗(yàn)

尿液常規(guī)檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)化及質(zhì)量控制

腦脊液、胸腹水常規(guī)檢驗(yàn)與形態(tài)學(xué)

常規(guī)檢驗(yàn)與遺傳學(xué)分析

其他體液檢驗(yàn)與質(zhì)量控制

3．血栓與止血

新的檢測(cè)方法在血栓與止血檢驗(yàn)中的應(yīng)用

項(xiàng)目的優(yōu)化組合用于血栓病與出血病的篩檢

關(guān)于質(zhì)量控制，檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)化

關(guān)于血栓與止血的基礎(chǔ)研究

4．臨床輸血

臨床輸血安全與成分輸血

臨床輸血質(zhì)量控制和管理

臨床輸血新技術(shù)、新進(jìn)展

免疫血液學(xué)

5．基因診斷

細(xì)胞遺傳學(xué)檢驗(yàn)

疾病的分子學(xué)診斷

6．實(shí)驗(yàn)室管理及其他

醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可

醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室的現(xiàn)代化管理、檢驗(yàn)結(jié)果的溯源性和檢驗(yàn)過(guò)程的規(guī)范化

臨床實(shí)驗(yàn)室室間質(zhì)量評(píng)價(jià)、臨床實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制及實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理

實(shí)驗(yàn)室（生物）安全管理

循證檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)

計(jì)算機(jī)網(wǎng)絡(luò)化、信息化在檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用

檢驗(yàn)與臨床的溝通

檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)教育的新技術(shù)、新進(jìn)展、新方法、新經(jīng)驗(yàn)

（三） 大會(huì)征文摘要格式要求及投稿方式

1．未公開(kāi)發(fā)表的原創(chuàng)研究性論文、綜述、工作報(bào)告、經(jīng)驗(yàn)交流等，來(lái)稿請(qǐng)寄全文和800字以內(nèi)的摘要各一份。

2．論文摘要語(yǔ)言為中文或英文，以Microsoft Word編輯，DOC文件格式，A4紙打印。中文用宋體，不超過(guò)800字；英文用Time New Roman字體，不超過(guò)300字，單倍行距。

3．論文提交方式：

（1）通過(guò)電子郵件附件形式發(fā)送至下列E-mail地址：

192.168.0.省略 ；有關(guān)本次會(huì)議的動(dòng)態(tài)信息請(qǐng)上網(wǎng)查閱：jinyi.省略/

（2）如電子郵件發(fā)送方式確有困難的，也可將論文打印稿及軟盤(pán)用郵件方式郵寄。

來(lái)稿請(qǐng)寄：湖北省 武漢市 漢口 解放大道1277號(hào)協(xié)和醫(yī)院檢驗(yàn)科 崔天盆收