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篇1

關(guān)鍵詞：SysmexXS-500i血液分析儀；人工鏡檢；檢測(cè)；異型淋巴細(xì)胞

傳染性單核細(xì)胞增多癥及病毒感染是由于外周血中出現(xiàn)異型淋巴細(xì)胞，臨床上常采用血涂片染色人工分類計(jì)數(shù)的方法計(jì)數(shù)其比例[1]。隨著檢驗(yàn)技術(shù)的發(fā)展，SysmexXS-500i血液分析儀因其診斷準(zhǔn)確率高，具有異型淋巴細(xì)胞提示功能，在臨床上被廣泛的運(yùn)用。為此，本文特將兩種檢測(cè)技術(shù)的結(jié)果進(jìn)行對(duì)比分析，現(xiàn)報(bào)告如下。

1資料與方法

1.1一般資料 收集我院2011年4月～2014年5月進(jìn)行異性淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)的標(biāo)本150例，其中，以單核細(xì)胞型為主的標(biāo)本有50例，以幼稚型細(xì)胞為主的標(biāo)本有60例，以漿細(xì)胞型為主的標(biāo)本有40例。

1.2方法 儀器及試劑：SysmexXS-500i血液分析儀；顯微鏡；乙二胺四乙酸二甲；血樣采集采用硅化管抗凝。

檢驗(yàn)方法：①人工鏡檢檢測(cè)：將患者標(biāo)本制成厚薄均一、體尾分明的涂片，采用瑞士-吉姆薩染液染色后，在顯微鏡觀察下，選擇體、尾處的血膜，計(jì)數(shù)100個(gè)白細(xì)胞。②SysmexXS-500i全自動(dòng)血液分析儀檢測(cè)：人工分類計(jì)數(shù)異型淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)大于20%的標(biāo)本20份，人工異型淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)大于10%，小于20%的標(biāo)本30份，人工異型淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)大于0%，小于10%的標(biāo)本40份，人工異型淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)為0%的標(biāo)本為60份。將人工分類的異型淋巴細(xì)胞送至SysmexXS-500i全自動(dòng)血液分析儀檢測(cè)，記錄各標(biāo)本的異型淋巴細(xì)胞提示信息。

1.3觀察指標(biāo) 觀察SysmexXS-500i全自動(dòng)血液分析儀與人工鏡檢的的檢測(cè)符合率。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 SysmexXS-500i全自動(dòng)血液分析儀與人工鏡檢的各項(xiàng)觀察指標(biāo)情況采用SPSS18.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理。檢測(cè)符合率采用？字2檢驗(yàn)，以P

2結(jié)果

人工鏡檢結(jié)果：異型淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)大于20%的標(biāo)本10份，符合率為50.00%，異型淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)大于10%，小于20%的標(biāo)本15份，符合率為50.00%，異型淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)大于0%，小于10%的標(biāo)本28份，符合率為70.00%，異型淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)為0%的標(biāo)本為40份，符合率為66.67%。

SysmexXS-500i全自動(dòng)血液分析儀檢測(cè)結(jié)果：異型淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)大于20%的標(biāo)本18份，符合率為90.00%，異型淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)大于10%，小于20%的標(biāo)本29份，符合率為96.67%，異型淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)大于0%，小于10%的標(biāo)本39份，符合率為97.50%，異型淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)為0%的標(biāo)本有57份，符合率為95.00%。

由此可知，SysmexXS-500i全自動(dòng)血液分析儀檢測(cè)符合率明顯優(yōu)于人工鏡檢的總符合率（P

3討論

異型淋巴細(xì)胞主要是由于病毒與B淋巴細(xì)胞受體結(jié)合形成，在不斷的復(fù)制及增殖過(guò)程中，被T淋巴細(xì)胞識(shí)別，從而激發(fā)T細(xì)胞的增殖及轉(zhuǎn)化，出現(xiàn)在循環(huán)血液中，形成細(xì)胞毒性效應(yīng)，主要以T細(xì)胞及B細(xì)胞為主[2]。

近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，異型淋巴細(xì)胞與EB病毒感染有關(guān)，EB病毒的囊膜主要由感染的細(xì)胞核膜組成，核膜上有識(shí)別淋巴細(xì)胞上的EB病毒受體，EB病毒導(dǎo)致的傳染性細(xì)胞增多癥中的異型淋巴細(xì)胞顯著增多。根據(jù)異型淋巴細(xì)胞與病毒的關(guān)系，臨床檢驗(yàn)中應(yīng)加強(qiáng)異型淋巴細(xì)胞的檢查。在檢測(cè)過(guò)程中，應(yīng)采用最新的檢查技術(shù)，提高異型淋巴細(xì)胞的檢測(cè)率，確保傳染性單核細(xì)胞增多癥的及時(shí)確診，及時(shí)治療[3]。SysmexXS-500i自動(dòng)化血液分析儀主要采用半導(dǎo)體激光照射分析技術(shù)，結(jié)合核酸染色技術(shù)，當(dāng)半導(dǎo)體激光照射被檢測(cè)細(xì)胞時(shí)，細(xì)胞內(nèi)容物被側(cè)向散射光反映出來(lái)，細(xì)胞體積被前向散射光反映出來(lái)，其中，側(cè)向散射光被主要反映細(xì)胞內(nèi)的DNA與RNA的含量，通過(guò)細(xì)胞產(chǎn)生的信號(hào)對(duì)異型淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)[4]。正常淋巴細(xì)胞的特點(diǎn)為體積小、顆粒少，在前向散射光及側(cè)向散射光的二維三點(diǎn)圖上表現(xiàn)為低前向散射光及側(cè)向散射光。由于EB病毒的刺激，異型淋巴細(xì)胞表現(xiàn)為體積大、顆粒少等特點(diǎn)，在SysmexXS-500i自動(dòng)化血液分析儀檢測(cè)中，表現(xiàn)為高前向散射光、低側(cè)向散射光，在正常的淋巴細(xì)胞上形成一個(gè)淋巴細(xì)胞群，并表現(xiàn)為向上拖尾的形狀[5]。測(cè)定異型淋巴細(xì)胞比傳染性單核細(xì)胞多了一個(gè)指標(biāo)，但是由于異型淋巴細(xì)胞的形態(tài)具有多樣性，大淋巴細(xì)胞的診斷難度較大，采用人工鏡檢技術(shù)會(huì)存在一定的誤差。而SysmexXS-500i全自動(dòng)化血液分析儀，可通過(guò)利用前向散射光及側(cè)向散射光這一特性，為區(qū)分淋巴細(xì)胞提供了指標(biāo)[6]。

綜上情況可知，SysmexXS-500i全自動(dòng)化血液分析儀檢測(cè)符合率明顯優(yōu)于人工鏡檢的總符合率（P

總而言之，SysmexXS-500i全自動(dòng)化血液分析儀檢測(cè)異型淋巴細(xì)胞總符合率明顯優(yōu)于人工鏡檢，可將檢測(cè)結(jié)果及時(shí)反饋至臨床，為臨床治療提供依據(jù)。

參考文獻(xiàn)：

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篇2

[關(guān)鍵詞] 彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤；MYC；Bcl-2；臨床特征

[中圖分類號(hào)] R733.4 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1673-7210（2016）06（b）-0025-04

彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤（diffuse large B cell lymphoma，DLBCL）是彌漫性增生的大B細(xì)胞惡性腫瘤，瘤細(xì)胞核大于或等于正常巨噬細(xì)胞核，或超過(guò)2倍正常淋巴細(xì)胞，包括縱隔（胸腺）大B細(xì)胞淋巴瘤、血管內(nèi)大B細(xì)胞淋巴瘤等。非霍奇金淋巴瘤（non-hodgkin lymphoma，NHL）中最為常見(jiàn)的一種類型，其在組織學(xué)、免疫表型、病因?qū)W、遺傳學(xué)、臨床病理特征和預(yù)后等方面都表現(xiàn)出高度的異質(zhì)性[1]，不同亞類的彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤臨床過(guò)程和預(yù)后不盡相同彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞不同的免疫表型可能與腫瘤的生物學(xué)行為和預(yù)后有密切關(guān)系?！半p打擊”B細(xì)胞淋巴瘤（double-hit lymphoma，DHL）是一種近年來(lái)被確認(rèn)的B細(xì)胞淋巴瘤分子分型，主要涉及MYC和Bcl-2基因的重排[2]。近年來(lái)，MYC和Bcl-2蛋白的異常表達(dá)與彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤發(fā)生、發(fā)展的關(guān)系逐漸受到關(guān)注，本研究也通過(guò)檢測(cè)MYC和Bcl-2蛋白的表達(dá)水平來(lái)了解彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤患者的臨床特征，從而判斷患者的療效及預(yù)后，可能具有重大的臨床意義。同時(shí)本研究還通過(guò)分析MYC和Bcl-2蛋白陽(yáng)性表達(dá)患者的臨床特征差異，以期評(píng)估不同MYC或Bcl-2蛋白表達(dá)水平患者的療效及預(yù)后。

1 資料與方法

1.1 一般資料

回顧性分析2012年1月～2016年1月第三軍醫(yī)大學(xué)附屬大坪醫(yī)院收治的61例彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤患者的臨床資料，所有患者均為首發(fā)病例，且臨床資料完整，均符合年世界衛(wèi)生組織制訂彌漫性大B細(xì)胞淋巴的診斷標(biāo)準(zhǔn)[1]。其中男33例，女28例；年齡45～70歲，平均（62.97±12.42）歲；原發(fā)部位：腹股溝淋巴結(jié)23例，胃腸道18例，頸部14例，其他6例；細(xì)胞來(lái)源：生發(fā)中心內(nèi)亞型24例，生發(fā)中心外亞型37例；IPI評(píng)分0～1分13例，2分17例，3分19例，4～5分12例；臨床分期：Ⅰ～Ⅱ期27例，Ⅲ～Ⅳ期34例；緩解40例，未緩解21例；1年總生存51例，3年總生存41例。所有患者均經(jīng)知情同意并簽署知情同意書(shū)，本研究經(jīng)我院醫(yī)學(xué)倫理會(huì)審核批準(zhǔn)。

1.2 檢測(cè)方法

將患者淋巴結(jié)組織蠟塊標(biāo)本經(jīng)10%中性甲醛溶液固定，常規(guī)脫水，石蠟包埋，4 μm厚切片，常規(guī)脫蠟水化。0.3%過(guò)氧化氫（H2O2）阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，10%小牛血清封閉切片，滴加一抗，4℃過(guò)夜。PBS洗后滴加廣譜生物素化二抗（1∶200，北京中杉金橋生物科技有限公司），SP復(fù)合物（1∶200），DBA顯色（DBA試劑盒購(gòu)于北京中杉金橋生物科技有限公司），蘇木精復(fù)染細(xì)胞核，脫水，透明，封片。分別設(shè)相應(yīng)陽(yáng)性、陰性、空白對(duì)照。所有病理標(biāo)本切片用PBS液代替一抗作陰性對(duì)照。MYC蛋白主要表達(dá)在細(xì)胞核和細(xì)胞漿，Bcl-2蛋白表達(dá)在細(xì)胞質(zhì)，主要表現(xiàn)為棕黃色或棕褐色細(xì)小顆粒。400倍高倍鏡下對(duì)隨機(jī)選取10個(gè)視野，每個(gè)視野計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞，計(jì)數(shù)陽(yáng)性率，陽(yáng)性率>10%為陽(yáng)性表達(dá)。

1.3 觀察指標(biāo)及評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

觀察患者M(jìn)YC、Bcl-2的陽(yáng)性表達(dá)率；觀察患者的性別、年齡、原發(fā)部位、細(xì)胞來(lái)源、結(jié)外受侵情況、淋巴瘤國(guó)際預(yù)后指數(shù)（IPI）評(píng)分、臨床分期、治療效果及生存情況分布等臨床特征；觀察比較Bcl-2/MYC陽(yáng)性及陰性表達(dá)患者的臨床特征差異；觀察MYC或Bcl-2陽(yáng)性表達(dá)的臨床特征差異。國(guó)際預(yù)后指數(shù)（IPI）評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)：年齡≤60歲=0分，>60歲=1分；行為狀態(tài)0、1為0分，2、3、4為1分；Ann Arbor分期Ⅰ或Ⅱ期為0分，Ⅲ、Ⅳ期為1分；LDH正常為0分，高于正常為1分；結(jié)外病變受侵部位數(shù)

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，兩組間比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料用率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，以P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Bcl-2/MYC陽(yáng)性與陰性表達(dá)患者的臨床特征差異

Bcl-2/MYC陽(yáng)性表達(dá)患者性別、年齡、原發(fā)部位及細(xì)胞來(lái)源與Bcl-2/MYC陰性表達(dá)患者比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）；而B(niǎo)cl-2/MYC陽(yáng)性表達(dá)患者結(jié)外受侵情況、IPI評(píng)分、臨床分期、治療效果及生存情況比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。見(jiàn)表1。

2.2 Bcl-2陽(yáng)性與MYC陽(yáng)性表達(dá)患者的臨床特征差異

Bcl-2陽(yáng)性表達(dá)患者性別、年齡、原發(fā)部位、細(xì)胞來(lái)源、結(jié)外受侵情況、IPI評(píng)分、臨床分期、治療效果及生存情況分布相似，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）。見(jiàn)表2。

3 討論

彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤作為常見(jiàn)的侵襲性淋巴瘤，是一種起源于淋巴組織的增殖性疾病，其臨床療效及預(yù)后的差異性較大。由于其惡性程度較高，發(fā)病原因及發(fā)病機(jī)制不甚明了，且該病常常呈進(jìn)展性，大多數(shù)患者確診時(shí)已為晚期。未予治療的患者，1年生存率極低，若給予聯(lián)合利妥昔單抗（美羅華）的方案化療，可獲得較為滿意的臨床緩解率和較長(zhǎng)的無(wú)病生存率。但彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤多發(fā)于老年人，本次研究中納入患者的平均年齡為（58.97±12.42）歲，患者療效及耐受性均較差，因此治療前有效評(píng)估患者的臨床療效及預(yù)后對(duì)于臨床治療方案的制訂尤為重要。由于IPI綜合了年齡、侵犯部位、疾病進(jìn)展程度和腫瘤負(fù)荷等多項(xiàng)參數(shù)，長(zhǎng)期以來(lái)被廣泛應(yīng)用于彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤患者預(yù)后的評(píng)估，并一直被用作彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤判斷預(yù)后的指標(biāo)之一[3]。

研究顯示，IPI每增加1分，死亡風(fēng)險(xiǎn)增加1.055倍[4]。大量研究發(fā)現(xiàn)，遺傳學(xué)異常多可累及多條染色體，而彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤常見(jiàn)的發(fā)生遺傳學(xué)改變的基因?yàn)镸YC、Bcl-2、Bcl-6[5-7]。MYC基因是位于染色體8q24的原癌基因，是一種轉(zhuǎn)錄因子，具有重要的細(xì)胞功能，對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖、分化、代謝及促進(jìn)新生血管形成等發(fā)揮重要作用[8]。大量研究表明，c-MYC基因異常與非霍奇金淋巴瘤不良預(yù)后相關(guān)，c-MYC重排是獨(dú)立于IPI的不良預(yù)后因子[9-12]。Akkaya等[13]研究發(fā)現(xiàn)，MYC基因異常與彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤預(yù)后密切相關(guān)，可作為預(yù)測(cè)彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤的預(yù)后因素并指導(dǎo)治療。c-MYC基因易位引起的重排較少見(jiàn)，淋巴結(jié)和結(jié)外彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤中出現(xiàn)c-MYC重排的發(fā)生率分別為2%和10%，但胃腸道彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤可高達(dá)28%，且治療后完全緩解率較高[14-15]。Bcl-2基因易位是濾泡性淋巴瘤的遺傳學(xué)特征，存在于20%～30%的彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤患者中，提示腫瘤起自濾泡性淋巴瘤高度惡性轉(zhuǎn)化[16]，大量的研究表明Bcl-2蛋白可以作為獨(dú)立于臨床分期和免疫類型的彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤預(yù)后因子[17-20]。彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤可包括中心母細(xì)胞型、免疫母細(xì)胞型、富于T細(xì)胞/組織細(xì)胞型、間變細(xì)胞型、漿母細(xì)胞型及表達(dá)ALK全長(zhǎng)型，而常見(jiàn)型有以下3種亞型：①中心母細(xì)胞型：最為常見(jiàn)的一種，瘤細(xì)胞主要為中心母細(xì)胞；②免疫母細(xì)胞型：是DLBCL中與免疫母細(xì)胞相似的、數(shù)量占腫瘤細(xì)胞的絕大多數(shù)的類型；③間變細(xì)胞型：腫瘤細(xì)胞胞體大、異形多核。DLBCL變異型較少見(jiàn)，其病變部位可出現(xiàn)黏液間質(zhì)和原纖維樣基質(zhì)。本次研究中，Bcl-2/MYC陽(yáng)性表達(dá)患者其IPI評(píng)分情況總體高于Bcl-2/MYC陰性患者，而緩解率、1年生存率及3生存率均明顯低于Bcl-2/MYC陰性患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。

國(guó)外大量研究顯示，MYC和Bcl-2高表達(dá)，提示彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤患者預(yù)后較差[21-22]。而國(guó)內(nèi)張曉娟等[23]研究也發(fā)現(xiàn)，MYC和Bcl-2低表達(dá)均可使彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤患者總生存時(shí)間及無(wú)進(jìn)展生存期延長(zhǎng)，MYC和Bcl-2的檢測(cè)對(duì)彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤患者的預(yù)后具有判斷價(jià)值，可作為判斷預(yù)后的分子標(biāo)志物。由此可見(jiàn)，MYC和Bcl-2在彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤臨床治療效果及預(yù)后評(píng)估中具有重要的臨床價(jià)值。Bcl-2和Bcl-6陽(yáng)性表達(dá)提示近期療效與預(yù)后不佳，其水平可被視為獨(dú)立的彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤分析因素，對(duì)患者治療過(guò)程中病情發(fā)展的預(yù)測(cè)、個(gè)體化治療策略的制訂有重要意義[24]。Green等[25]研究發(fā)現(xiàn)，免疫組化法檢測(cè)MYC和Bcl-2共陽(yáng)性表達(dá)患者治療后完全緩解率低，3年生存期及無(wú)進(jìn)展生存期均短于非共陽(yáng)性表達(dá)患者。但MYC與Bcl-2共存于彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤的概率并不是很高，多數(shù)情況下是MYC或Bcl-2異常表達(dá)，有研究者回顧性分析了30例彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤患者的臨床資料，結(jié)果顯示MYC、Bcl-2共陽(yáng)性表達(dá)率為30%[26]。目前，關(guān)于MYC和Bcl-2的臨床價(jià)值差異的相關(guān)研究極為少見(jiàn)，因此本研究觀察比較了MYC陽(yáng)性表達(dá)患者與Bcl-2陽(yáng)性表達(dá)患者的臨床特征差異，結(jié)果發(fā)現(xiàn)Bcl-2陽(yáng)性表達(dá)患者性別、年齡、原發(fā)部位、細(xì)胞來(lái)源、結(jié)外受侵情況、IPI評(píng)分、臨床分期、治療效果及生存情況分布相似（P > 0.05），尚未發(fā)現(xiàn)MYC與Bcl-2異常表達(dá)對(duì)彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤在療效及預(yù)后評(píng)估方面的價(jià)值差異，但本次研究納入的樣本量較少，希望在以后的研究中擴(kuò)大樣本量，以進(jìn)一步證實(shí)。

綜上所述，Bcl-2或MYC陽(yáng)性表達(dá)與彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤患者的病情嚴(yán)重程度及療效相關(guān)，且MYC陽(yáng)性表達(dá)與Bcl-2陽(yáng)性表達(dá)患者的臨床特征無(wú)明顯差異，提示MYC與Bcl-2在彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤中存在相似的臨床評(píng)估價(jià)值。

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篇3

患者女性，72歲，糖尿病9年。高血壓8年。1年前右足麻木疼痛，四月前右足扭傷致輕度裂縫骨折，后右小腿肌肉開(kāi)始腫脹。查體：患者呈貧血貌，淺表淋巴結(jié)未觸及腫大。右小腿硬腫，皮溫高，輕度指壓性水腫。右足下垂，背曲，跖曲受限。深淺感覺(jué)均消失。

MRI檢查示：右小腿后部肌肉體積不規(guī)則增大，信號(hào)不均，可見(jiàn)多發(fā)長(zhǎng)梭形團(tuán)塊狀、結(jié)節(jié)狀異常信號(hào)，F(xiàn)ST2WI呈稍高信號(hào)，T1WI呈稍低信號(hào)，F(xiàn)ST1WI呈等信號(hào)，肌肉正常形態(tài)尚可辨認(rèn)，肌間隙清楚，增強(qiáng)后，病變呈明顯欠均勻團(tuán)狀強(qiáng)化。

討論：惡性淋巴瘤是淋巴結(jié)和（或）淋巴組織的免疫細(xì)胞腫瘤【1-4】，來(lái)源于淋巴細(xì)胞組織的惡變，可分為霍奇金?。℉D）和非霍奇金淋巴瘤（NHL）兩類，近些年發(fā)病率逐漸上升，尤其是非霍奇金淋巴瘤，多以淋巴結(jié)受累常見(jiàn)，而原發(fā)于骨骼肌組織的則很少見(jiàn)，且大部分為NHL，繼發(fā)者較原發(fā)者高近10倍。原發(fā)于骨骼肌的淋巴瘤主要表現(xiàn)為軟組織團(tuán)塊及相鄰重要器官受壓迫而產(chǎn)生功能及形態(tài)改變。原發(fā)病灶多以長(zhǎng)骨肌束為主，如下肢及臀部，一般沿肌束為中心向兩端生長(zhǎng)呈梭形，常伴皮膚及鄰近骨膜受侵，多為有痛性、彌漫性生長(zhǎng)且邊界不清的腫塊，區(qū)域淋巴結(jié)受侵少見(jiàn)。其中最多見(jiàn)的病理類型為彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤，T細(xì)胞淋巴瘤偶見(jiàn)。

原發(fā)于骨骼肌間的淋巴瘤影像學(xué)表現(xiàn)主要有；

（1）病變肌肉呈彌漫性增大，形態(tài)尚可分辨；

（2）腫瘤的供血豐富，且少見(jiàn)壞死，故行CT、MRI增強(qiáng)掃描腫瘤呈中度不均勻強(qiáng)化；

（3）相鄰骨骼可多處受侵，表現(xiàn)為髓內(nèi)多發(fā)水腫區(qū)。

（4）局部淋巴結(jié)及遠(yuǎn)處淋巴結(jié)可腫大。

（5）多見(jiàn)于四肢，尤以大腿及上肢部位好發(fā)。

（6）中老年人多見(jiàn)。

（7）臨床表現(xiàn)為腫脹、疼痛及全身不適，可伴發(fā)熱、消瘦，少數(shù)患者可無(wú)任何不適。

本例患者為老年女性，臨床主要表現(xiàn)為右小腿腫脹，病變位于右小腿骨骼肌內(nèi)，MRI上表現(xiàn)為小腿肌肉彌漫性腫大，受累肌肉形態(tài)仍可辨認(rèn)，增強(qiáng)掃描病變呈明顯不均勻強(qiáng)化，應(yīng)考慮到惡性淋巴瘤可能，但由于該例患者有糖尿病病史，故本病例曾誤診為糖尿病肌病，經(jīng)免疫組化確診為大B細(xì)胞淋巴瘤?，F(xiàn)回顧總結(jié)，以增加對(duì)本病的認(rèn)識(shí)。

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篇4

【摘要】 本研究探討造血干細(xì)胞移植（HSCT）對(duì)惡性淋巴系統(tǒng)血液病的療效。通過(guò)8例非霍奇金淋巴瘤（NHL）及3例淋巴細(xì)胞白血病患者在前期化療基礎(chǔ)上進(jìn)行造血干細(xì)胞移植，分別觀察造血重建、并發(fā)癥及生存期等指標(biāo)，以了解造血干細(xì)胞移植對(duì)該類疾病的療效。結(jié)果表明：HSCT后11例患者(其中自體移植7例，異基因移植4例)造血順利恢復(fù)，均能達(dá)到完全緩解（CR）。隨訪3年，5例NHL患者無(wú)病生存，1例NHL患者于移植后2個(gè)月死亡，1例自殺；4例接受異基因造血干細(xì)胞移植的患者中，1例非霍奇金淋巴瘤（NK細(xì)胞型）移植后79天死亡，1例慢性淋巴細(xì)胞白血病患者無(wú)病生存，2例急性淋巴細(xì)胞白血病患者分別于移植后第54天、第17個(gè)月死亡。結(jié)論：造血干細(xì)胞移植是治療惡性淋巴系統(tǒng)血液疾病的一個(gè)有效手段，但自體HSCT的患者尚有一定的復(fù)發(fā)率，而異基因HSCT患者有可能因嚴(yán)重的移植相關(guān)并發(fā)癥而死亡。

【關(guān)鍵詞】 造血干細(xì)胞移植；淋巴瘤；淋巴細(xì)胞白血病

Effect of Hematopoietic Stem Cell Transplantation in Malignant Hematologic Disease of Lymphatic System

AbstractThe study was aimed to investigate the effect of hematopoietic stem cells transplantation (HSCT) in treatment for hematologic maglignacies of lymphatic system. Through observing 8 patients with non-Hodgkin′s lymphoma (NHL) and 3 patients with lymphoblastic leukemia， who received auto or allo-HSCT after chemotheraphy， the hematopoietic reconstitution， complication and surviral time were evaluated. The results showed that 11 patients (7 patients after auto-PBSCT， 4 patients after allo-PBSCT) all achieved hematopoietic reconstitution and complete remission (CR). Within three years following-up， 5 patients with NHL were survival， but one case of NHL died at the 2 months after auto-PBSCT， one patient suicided. From 4 cases received allo-PBSCT， one patiant with NHL (NK cell) was died at 79 days later， one patient with chronic lymphoblastic leukemia was surviving， another 2 cases of acute lymphoblastic leukemia were dead at 17 months and 54 days respectively after allo-PBSCT. In conclusion HSCT is an effective treatment for hematologic maglignancies of lymphatic system， but the replase would occur in some patients received auto-PBSCT. The others by allo-PBSCT might die of severe complication of transplantation.

Key wordshematopoietic stem cells transplantation; lymphoma; lymphoblastic leukemia

造血干細(xì)胞移植（HSCT）已被公認(rèn)為是治療惡性血液病的有效方法，特別是對(duì)急慢性白血病及中高度惡性、初治耐藥、易于復(fù)發(fā)等預(yù)后不良淋巴瘤效果尤為突出［1］。外周血造血干細(xì)胞移植（PBHSCT）是HSCT中的一種類型，因其采集方法簡(jiǎn)便，移植后造血重建迅速，痛苦相對(duì)較少，易于被患者個(gè)人或供者接受，而廣泛應(yīng)用于臨床治療。本研究在已有的造血干細(xì)胞移植研究基礎(chǔ)上［2-7］，重點(diǎn)探討HSCT治療淋巴系統(tǒng)惡性血液病的效果。

材料和方法

病種和移植類型

11例移植患者中，男6例，女5例，年齡15-56歲（中位年齡35歲），其中非霍奇金淋巴瘤8例（彌漫性大B細(xì)胞型5例，B細(xì)胞源性2例，NK細(xì)胞型1例），急性淋巴細(xì)胞白血病2例，慢性淋巴細(xì)胞白血病1例。移植類型：自體外周血干細(xì)胞移植7例，異基因HLA單倍相合親緣移植4例（其中2例為非清髓移植，2例為清髓移植）（表1）。 Table 1. Information of 11 patients with malignant hematologic disease of lymphatic system after HSCT（略）

干細(xì)胞的采集、動(dòng)員、保存

對(duì)所有異基因造血干細(xì)胞供者均予粒細(xì)胞集落刺激因子（G-CSF）動(dòng)員外周血干細(xì)胞，10 μg/（kg·d）分2次皮下注射共5天，所有自體造血干細(xì)胞移植患者先予環(huán)磷酰胺（cyclophosphamide，CTX）聯(lián)合G-CSF動(dòng)員外周血干細(xì)胞，再用CS-3000 plus (Baxter公司產(chǎn)品)分離外周血干細(xì)胞，每次循環(huán)血量10 L左右，如1次采集干細(xì)胞數(shù)量不足，可于第2日重復(fù)采集直至CD34+細(xì)胞數(shù)量超過(guò)3×106/kg，將采集到的外周血造血干細(xì)胞放置液氮中保存。

預(yù)處理方案及干細(xì)胞回輸

自體造血干細(xì)胞移植（auto-HSCT)中，有6例采用CBV方案(CTX/VP-16/CCNU)，1例選用MA方案（MIT/Ara-C）進(jìn)行移植術(shù)前預(yù)處理。異基因造血干細(xì)胞移植（allo-HSCT)中，2例非清髓干細(xì)胞移植者，1例采用環(huán)磷酰胺+阿糖胞苷+全身照射（CTX/Ara-C/TBI），1例采用氟達(dá)拉濱(fludarabine，F(xiàn)AMP)+環(huán)磷酰胺進(jìn)行預(yù)處理；2例清髓干細(xì)胞移植者，1例采用CTX+TBI，1例采用CTX/VP-16/TBI進(jìn)行術(shù)前預(yù)處理。所有患者在預(yù)處理結(jié)束后均予以輸注含CD34+細(xì)胞數(shù)平均為5.5 ×106/kg的未去T細(xì)胞的移植物，移植后即開(kāi)始使用G-CSF （300 μg/d），直至WBC ＞3 ×109/L后停用。

結(jié)果

造血重建

11例患者中性粒細(xì)胞（ANC）＞0.5×109/L平均天數(shù)為11（8-18）天，血小板（Plt） ＞20×109/L平均天數(shù)為12（8-23）天（表2）。Table 2. Hematopoietic reconstitution， complication and prognosis of 11 patients with malignant hematologic disease of lymphatic system after HSCT（略）

并發(fā)癥

自體造血干細(xì)胞移植中，3例患者在骨髓抑制期間出現(xiàn)肛周、口咽部、頸靜脈置管處感染，1例在造血功能恢復(fù)前因血小板低出現(xiàn)泌尿系出血。異基因造血干細(xì)胞移植中，1例出現(xiàn)移植物抗宿主?。℅VHD）及肝靜脈閉塞?。╲eno-occlusive diseease，VOD），1例出現(xiàn)移植物抗宿主病及出血性膀胱炎（hemorrhagic cystitis，HC）、間質(zhì)性肺炎。

近期療效

8例非霍奇金淋巴瘤患者中，5例為彌漫大B細(xì)胞型，2例為B細(xì)胞源性，1例為NK/T細(xì)胞型，移植前5例CR，3例PR，按文獻(xiàn)［8］標(biāo)準(zhǔn)，外周血干細(xì)胞移植術(shù)后8例均為CR；3例淋巴細(xì)胞白血病患者中1例為CLL A期，2例為ALL，其中有1例多次復(fù)發(fā)，移植術(shù)后3例均達(dá)到CR。

生存期

隨訪3年，自體移植7例患者中，除1例自殺身亡，1例術(shù)后再次復(fù)發(fā)出現(xiàn)肝臟、中樞神經(jīng)系統(tǒng)廣泛浸潤(rùn)，于移植術(shù)后2月死亡外，其余5例均無(wú)病生存。異基因移植4例患者中，除1例CLL患者無(wú)病生存外，其余3例分別于移植后54天、2個(gè)月、17個(gè)月死亡。

討論

上述7例auto-HSCT患者均為非霍奇金淋巴瘤彌漫大B細(xì)胞型或B細(xì)胞型，已有報(bào)道明確表明，放（化）療大約可使30%的NHL病人長(zhǎng)期存活，但對(duì)于中、高度惡性NHL病人的長(zhǎng)期生存改善不明顯，auto-PBSCT已成為中、高度惡性非霍奇金淋巴瘤病人治療的標(biāo)準(zhǔn)方案之一［9］。對(duì)于初治未達(dá)到CR的侵襲性NHL病人，常規(guī)挽救治療的效果比較差，長(zhǎng)期無(wú)病生存率很低，而auto-PBSCT卻能獲得較高的CR率和PR率，5年生存率達(dá)37%［10］。我院所采用auto-PBSCT治療的7例患者中，有3例為初治未達(dá)到CR的淋巴瘤，5例為中度惡性淋巴瘤，經(jīng)過(guò)auto-PBSCT后7例均達(dá)到CR標(biāo)準(zhǔn)，其中1例彌漫大B細(xì)胞型患者移植前經(jīng)CHOP方案、proMACE-cytoBOM方案、MACOP-B方案多次化療后均不能緩解，行auto-PBSCT治療后復(fù)查各項(xiàng)指標(biāo)提示達(dá)到CR標(biāo)準(zhǔn)，但2月后再次復(fù)發(fā)，出現(xiàn)肝臟及中樞神經(jīng)系統(tǒng)廣泛侵潤(rùn)最終導(dǎo)致死亡。因此可以說(shuō)，自體干細(xì)胞移植無(wú)供受者之間的免疫排斥，合并癥少，造血重建快，既使出現(xiàn)骨髓抑制引發(fā)的感染、出血、貧血癥狀，予以細(xì)胞因子刺激造血，同時(shí)加強(qiáng)抗感染、輸紅細(xì)胞懸液、血小板及對(duì)癥處理后也可迅速恢復(fù)，確實(shí)是治療中高度惡性、初治耐藥難治性惡性淋巴瘤的有效方法，但同時(shí)也要看到因?yàn)樽泽w干細(xì)胞移植缺乏GVL效應(yīng)，易于在移植之后再次復(fù)發(fā)，降低了auto-PBSCT對(duì)該類疾病的總體有效率。

鑒于auto-HSCT治療NHL有一定的復(fù)發(fā)率，且國(guó)際上也存在采用異基因造血干細(xì)胞移植（allo-HSCT）治療侵襲性淋巴瘤的病例，遂予例8患者進(jìn)行了非清髓allo-HSCT治療，移植過(guò)程中患者造血重建恢復(fù)迅速，也未出現(xiàn)嚴(yán)重GVHD及其他相關(guān)移植并發(fā)癥，可能與術(shù)中有效使用環(huán)孢素（CsA）、驍悉（MMF）進(jìn)行移植物抗宿主病預(yù)防有關(guān)，但移植后患者再次復(fù)發(fā)，較術(shù)前有明顯進(jìn)展，出現(xiàn)顱內(nèi)及脾臟多處浸潤(rùn)。有研究表明，對(duì)侵襲性淋巴瘤的治療，可考慮采用allo-HSCT取代auto-HSCT， 但采用allo-HSCT仍有25%復(fù)發(fā)率，且移植相關(guān)死亡率較高，使其總體生存率（OS）僅有18%-35%［11，12］，近年來(lái)有報(bào)道顯示采用allo-HSCT治療惡性淋巴瘤OS可升至76%［13］，所以allo-HSCT對(duì)NHL具有治愈潛能，但因其高移植相關(guān)死亡率，同時(shí)也存在移植后復(fù)發(fā)可能，因此需有選擇地對(duì)該類患者進(jìn)行allo-HSCT。目前，allo-HSCT在治療急性白血病方面已得到公認(rèn)。在上述11例患者中，有2例ALL患者進(jìn)行了清髓allo-HSCT，分別采用CTX+TBI、CTX+VP16+TBI作為預(yù)處理方案。例6患者造血重建略有延遲，例7造血重建迅速，分別出現(xiàn)Ⅱ度aGVHD和Ⅲ度aGVHD，移植后2例患者均完全緩解，但例7因同時(shí)存在出血性膀胱炎及巨細(xì)胞病毒感染導(dǎo)致的間質(zhì)性肺炎于移植后第54天死亡，例6因廣泛性cGVHD在移植17個(gè)月后死亡。雖然allo-HSCT治療急性白血病效果已得到肯定，但上述2例患者無(wú)病生存時(shí)間較短可能與預(yù)處理強(qiáng)度、配型為單倍相合及嚴(yán)重移植相關(guān)并發(fā)癥有關(guān)。此外，allo-HSCT在CLL中的應(yīng)用也逐漸被重視起來(lái)。Pavletic等［14］報(bào)道了用allo-HSCT治療23例CLL的情況，結(jié)果顯示在這些移植后患者中完全緩解率達(dá)到87%，5年的無(wú)病生存率僅為65%，復(fù)發(fā)率為5%。雖然本研究中僅有1例為采用非清髓allo-HSCT治療的CLL患者，但其移植后亦達(dá)到完全緩解并且無(wú)病生存。綜上所述，雖然自體造血干細(xì)胞移植患者尚存在復(fù)發(fā)的可能，異基因造血干細(xì)胞移植患者有一定的移植相關(guān)死亡率，但造血干細(xì)胞移植仍然是治療惡性淋巴系統(tǒng)血液疾病的一個(gè)有效方法，值得在臨床工作中推廣。

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篇5

關(guān)鍵詞：CD8陽(yáng)性T細(xì)胞;乳腺癌;保護(hù)性免疫標(biāo)記物

乳腺癌是世界范圍內(nèi)發(fā)生于女性中最常見(jiàn)、最致命的惡性腫瘤。雖然近年來(lái)通過(guò)早期診斷和多重療法使得乳腺癌患者的預(yù)后有了改善，但評(píng)價(jià)期預(yù)后的方法仍然較為局限，因此目前迫切的需要能對(duì)其早期評(píng)價(jià)且篩選出能受益于高選擇性的靶向治療的預(yù)后標(biāo)記物 [1]。通過(guò)基因表達(dá)檢測(cè)，近段時(shí)間來(lái)一些免疫細(xì)胞相關(guān)的基因標(biāo)記物被發(fā)現(xiàn)也是判斷乳腺癌患者生存的良好預(yù)后判斷因子[2]。目前為止很多實(shí)驗(yàn)證實(shí)了在直腸癌、肺癌、食管癌、卵巢癌、腎透明細(xì)胞癌和胰腺癌患者中，CD8+T細(xì)胞的陽(yáng)性浸潤(rùn)與這些患者更長(zhǎng)的生存時(shí)間密切相關(guān)[5-10]。本次實(shí)驗(yàn)的目的是通過(guò)免疫組化染色396例乳腺癌標(biāo)本中浸潤(rùn)于癌巢和癌組織間質(zhì)中的CD8+ T細(xì)胞，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析其與患者DFS和OS之間的相關(guān)性。

1.材料與方法

1.1一般資料 本實(shí)驗(yàn)包括1990年至2003年岳陽(yáng)市二醫(yī)院普外科396例術(shù)前未做任何治療的淋巴結(jié)陰性乳腺癌患者腫瘤組織標(biāo)本。腫瘤分期為T1期至T3期，且在手術(shù)時(shí)無(wú)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。每一例患者都有完整的相關(guān)隨訪資料。通過(guò)篩選，在這396例標(biāo)本中，215（54.3%）例患者接受了經(jīng)典根治術(shù)和放療，181（45.7%）例患者接受了乳腺癌改良根治術(shù)。所有患者診斷時(shí)的年齡：33～89歲，平均年齡：（58.3±2.4）歲。有332例患者的經(jīng)過(guò)福爾馬林固定、石蠟包埋乳腺癌組織標(biāo)本可用來(lái)進(jìn)行免疫組化實(shí)驗(yàn)。平均隨訪時(shí)間為152個(gè)月，在此期間，53（15.6%）例患者死于乳腺癌復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移，46（13.6%）例患者死于與乳腺癌不相關(guān)的其他疾病，7（2.1%）例患者死亡原因不明，233例（68.7%）仍然生存，90（26.5%）例患者發(fā)生腫瘤的局部復(fù)發(fā)。進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析時(shí)我們剔除了死于其他原因的乳腺癌患者。

1.2方法 根據(jù)以前文獻(xiàn)報(bào)道的免疫組化染色標(biāo)準(zhǔn)法[3]，我們對(duì)厚度為4？m的乳腺癌組織進(jìn)行了免疫組化染色。福爾馬林固定、石蠟包埋的乳腺癌組織依次浸泡于不同濃度梯度的酒精和二甲苯，置于PH10的檸檬酸鹽緩沖液中并加熱25分鐘以行抗原修復(fù)，3%過(guò)氧化氫溶液在室溫下反應(yīng)5分鐘，1：50稀釋的單克隆CD8抗體在室溫下反應(yīng)60分鐘，二抗在室溫下反應(yīng)30分鐘，與DAB溶液在室溫下反應(yīng)5分鐘，與蘇木精溶液染色5分鐘，蓋玻片后將切片置于奧林帕斯顯微鏡下由本文中兩位受過(guò)組織免疫組化診斷培訓(xùn)且不知所有標(biāo)本臨床病理情況的作者進(jìn)行觀察評(píng)價(jià)。所有實(shí)驗(yàn)都包含陽(yáng)性（扁桃體）和陰性對(duì)照（未加一抗），所有的對(duì)照都顯示出適當(dāng)?shù)膶?shí)驗(yàn)結(jié)果。

1.3結(jié)果評(píng)價(jià) CD8+ T細(xì)胞呈棕褐色細(xì)胞膜染。根據(jù)以往文獻(xiàn)的報(bào)道[4]，我們?cè)u(píng)價(jià)了乳腺癌組織癌巢和癌間質(zhì)中CD8+ T細(xì)胞的浸潤(rùn)強(qiáng)度，簡(jiǎn)而言之，癌巢CD8+ T細(xì)胞指浸潤(rùn)于乳腺癌細(xì)胞之間或與癌細(xì)胞直接接觸的CD8+ T細(xì)胞，癌間質(zhì)CD8+ T細(xì)胞指浸潤(rùn)于癌巢之外間質(zhì)中不與癌細(xì)胞直接接觸的CD8+ T細(xì)胞。我們采用了一種半定量評(píng)分法評(píng)價(jià)CD8+ T細(xì)胞的浸潤(rùn)強(qiáng)度：0，無(wú)CD8+ T細(xì)胞浸潤(rùn);1+，CD8+ T細(xì)胞的弱陽(yáng)性浸潤(rùn);2+，CD8+ T細(xì)胞的中等陽(yáng)性浸潤(rùn);3+，CD8+ T細(xì)胞的強(qiáng)陽(yáng)性浸潤(rùn)。如兩位評(píng)價(jià)者對(duì)某一染色標(biāo)本的評(píng)價(jià)結(jié)果不一致，切片會(huì)被重新評(píng)價(jià)討論直到達(dá)成共識(shí)。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 Kaplan-Meier 法計(jì)算乳腺癌患者生存率?；颊邿o(wú)病生存時(shí)間（DFS）定義為乳腺癌確診至復(fù)發(fā)時(shí)間（包括局部復(fù)發(fā)，遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及發(fā)生對(duì)側(cè)乳腺癌），總生存時(shí)間（OS）為乳腺癌患者確診至死于該病的時(shí)間。單因素和多因素COX分析用于評(píng)價(jià)CD8+ T細(xì)胞和其他預(yù)后因子對(duì)乳腺癌3討論

研究證實(shí)CD8陽(yáng)性T細(xì)胞對(duì)人類多種惡性腫瘤的預(yù)后具有保護(hù)性效應(yīng)[5-6]，然而其在乳腺癌中的預(yù)后意義目前尚存在爭(zhēng)論。通過(guò)免疫組化染色CD8+ T細(xì)胞表面的CD8分子，我們測(cè)定了CD8+ T細(xì)胞在乳腺癌組織癌巢和癌間質(zhì)中的浸潤(rùn)強(qiáng)度，然后分析了此細(xì)胞與332例淋巴結(jié)陰性乳腺癌患者預(yù)后的相關(guān)性。雖然癌間質(zhì)CD8+ T細(xì)胞對(duì)患者生存沒(méi)有保護(hù)性效應(yīng)，但癌巢中CD8+ T細(xì)胞陽(yáng)性浸潤(rùn)卻與乳腺癌患者更長(zhǎng)的DFS和OS密切相關(guān)，且獨(dú)立于傳統(tǒng)預(yù)后判斷因子如確診年齡、腫瘤大小、組織學(xué)分級(jí)、雌激素受體狀態(tài)、孕激素受體狀態(tài)、人類表皮生長(zhǎng)因子受體2和Ki-67的表達(dá)。本實(shí)驗(yàn)的結(jié)果證實(shí)以CD8+ T 細(xì)胞為代表的細(xì)胞免疫系統(tǒng)，在乳腺癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中起著重要的抗腫瘤作用。 本實(shí)驗(yàn)和其他研究證實(shí)CD8+ T細(xì)胞的陽(yáng)性浸潤(rùn)與惡性腫瘤患者的更長(zhǎng)的生存時(shí)間密切相關(guān)，表明雖然在惡性腫瘤抑制性微環(huán)境中CD8+ T細(xì)胞仍然發(fā)揮著抗腫瘤效應(yīng)。Anz 等人的研究證實(shí)了雖然乳腺髓樣癌中浸潤(rùn)有大量的FOXP3陽(yáng)性調(diào)節(jié)性T細(xì)胞，CD8+ T細(xì)胞與患者良好的預(yù)后密切相關(guān)[7]，表明了在決定乳腺癌患者生存方面CD8+ T細(xì)胞的重要作用。

總而言之，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明乳腺癌癌巢CD8+ T細(xì)胞對(duì)乳腺癌患者預(yù)后有著顯著的保護(hù)性效應(yīng)。能夠改善其預(yù)后這就表明了以CD8+ T細(xì)胞代表的細(xì)胞免疫系統(tǒng)有著良好的抗腫瘤效應(yīng)，這種對(duì)患者生存的保護(hù)性作用可作為一種新型的免疫治療手段改善乳腺癌患者的預(yù)后。

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篇6

[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]B

[文章編號(hào)]1005-0019(2009)7-0017-02

[摘要]目的:分析慢性乙型肝炎患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群變化及其臨床意義。方法:慢性乙型肝炎患者152例,乙肝引起的肝硬化28例,健康對(duì)照者30例。采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)各自外周血淋巴細(xì)胞CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+等,并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果:與健康對(duì)照組比較,重度慢性乙型肝炎、肝炎肝硬化患者外周血CD3+、CD4+、CD8+均有顯著性下降(P0.05)。結(jié)論:重度慢性肝炎及肝硬化患者存在一定程度的細(xì)胞免疫功能紊亂,可能與其預(yù)后存在一定的相關(guān)性。

[關(guān)鍵詞]乙型肝炎;慢性;T淋巴細(xì)胞亞群

HBV感染是一個(gè)全球關(guān)注的健康問(wèn)題,也是世界范圍內(nèi)導(dǎo)致慢性肝臟疾病最常見(jiàn)的原因。乙型肝炎的臨床表現(xiàn)、病變程度及預(yù)后差異很大。正常情況下,大多數(shù)免疫功能健全的成人感染HBV后可通過(guò)免疫應(yīng)答的協(xié)調(diào)作用將其清除并獲得對(duì)HBV再次感染的抵抗力。但仍有5~10%的HBV感染者或經(jīng)垂直途徑感染HBV的人群不能有效清除病毒,從而導(dǎo)致HBV的持續(xù)感染,甚至最終發(fā)展為肝硬化或肝癌。許多研究表明機(jī)體的細(xì)胞免疫功能參與了慢性乙型肝炎的發(fā)病過(guò)程并在其中起著重要作用[1]。為此,我們應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)慢性乙型肝炎患者T淋巴細(xì)胞亞群水平,研究這些指標(biāo)測(cè)定的臨床意義。

1資料與方法

1.1病例選擇:收集2003年5月～2006年7月在龍口經(jīng)濟(jì)開(kāi)發(fā)區(qū)醫(yī)院住院的慢性乙型肝炎患者共152例。其中男性101例,女性51例;輕中度慢性乙型肝炎患者94例,重度慢性乙型肝炎患者58例。152例患者中HBVDNA定量檢測(cè)陽(yáng)性102例(HBVDNA>107拷貝/ml59例,HBVDNA

1.2方法

1.2.1標(biāo)本采集:采集患者晨起空腹靜脈血4ml,分成兩份,每份2ml。一份不加抗凝劑,分離血清后用于肝臟功能、肝炎病毒血清標(biāo)記物ELISA檢測(cè)及HBVDNA定量檢測(cè);另一份用EDTAK2抗凝,用于流式細(xì)胞儀檢測(cè)。

1.2.2外周血T淋巴細(xì)胞亞群的檢測(cè):采用常規(guī)免疫熒光標(biāo)記三色FACSCalibur流式細(xì)胞儀(美國(guó)BD公司)6小時(shí)內(nèi)測(cè)定CD3+、CD4+、CD8+絕對(duì)值計(jì)數(shù)。

1.2.3肝臟功能檢測(cè):全自動(dòng)生化分析儀進(jìn)行肝臟功能生化指標(biāo)檢測(cè)。

1.2.4肝炎病毒血清標(biāo)記物ELISA檢測(cè):選用華美生物工程公司的肝炎病毒血清標(biāo)記物ELISA檢測(cè)試劑盒進(jìn)行肝炎病毒血清標(biāo)記物檢測(cè)。

1.2.5HBVDNA定量檢測(cè):選用深圳匹基生物工程股份有限公司的HBVDNA熒光定量試劑盒。HBVDNA檢測(cè)結(jié)果均大于1×103copies/ml為陽(yáng)性。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)分析:應(yīng)用SPSS12.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。所有數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示,組間數(shù)據(jù)的顯著性比較采用方差分析和兩兩比較的q檢驗(yàn)。P

2結(jié)果

2.1患者的臨床特點(diǎn):輕中度慢性乙型肝炎組、重度慢性乙型肝炎組、肝炎肝硬化組患者的性別比、病程、ALT無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,具可比性。肝炎肝硬化組與重度慢性乙型肝炎組患者在血清總膽紅素水平、凝血酶原時(shí)間、血清白蛋白水平與血漿凝血酶原活動(dòng)度相比無(wú)顯著差異,具可比性。

2.2外周血淋巴細(xì)胞各亞群特點(diǎn):與正常對(duì)照組比較,輕中度慢性乙型肝炎患者CD3+、CD4+、CD8+及CD4+/CD8+比值無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;重度慢性乙型肝炎患者及肝炎肝硬變組外周血中CD3+、CD4+、CD8+均有顯著性下降(P

2.3HBVDNA不同復(fù)制水平患者的各亞群特點(diǎn):102例HBVDNA定量檢測(cè)陽(yáng)性患者中HBVDNA>107拷貝/ml59例,HBVDNA

3討論

乙型肝炎是一種免疫相關(guān)性疾病,其發(fā)病機(jī)制非常復(fù)雜。機(jī)體感染HBV后對(duì)肝細(xì)胞的損傷程度主要取決于機(jī)體的免疫應(yīng)答[3]。一旦感染HBV,機(jī)體免疫狀態(tài)的平衡將被打破,無(wú)論體液免疫還是特異性細(xì)胞免疫應(yīng)答在乙肝患者的外周血和肝臟中都將會(huì)有所體現(xiàn)[4-6]。因此研究HBV免疫病理機(jī)制的一個(gè)重要方法就是分析慢性感染者的外周血或肝臟來(lái)源的淋巴細(xì)胞亞群的組成[7]。

本組資料主要通過(guò)對(duì)慢性乙型肝炎患者的外周血CD3+、CD4+、CD8+淋巴細(xì)胞及CD4+/CD8+比值進(jìn)行分析了解不同疾病狀態(tài)淋巴細(xì)胞的變化特點(diǎn)。結(jié)果表明,與健康對(duì)照組比較,輕中度慢性乙型肝炎患者的淋巴細(xì)胞絕對(duì)值變化不明顯,而重度慢性乙型肝炎患者及肝炎肝硬化患者外周血中CD3+、CD4+、CD8+值則明顯下降,并以肝炎肝硬化患者的下降最為顯著(P

本組資料也對(duì)不同疾病狀態(tài)下CD4+/CD8+比值變化進(jìn)行分析,但未提示顯著性差異(P>0.05)。對(duì)HBVDNA高水平和低水平組的分別分析也未發(fā)現(xiàn)T細(xì)胞亞群之間的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,提示乙型肝炎患者外周血T亞群細(xì)胞數(shù)和比值變化與HBV復(fù)制活躍程度無(wú)明顯關(guān)系,進(jìn)一步說(shuō)明肝細(xì)胞病變與細(xì)胞內(nèi)HBV數(shù)量無(wú)明顯相關(guān)性。

既往曾有學(xué)者研究重型肝炎的免疫[8,9]反應(yīng),結(jié)果提示慢性重型肝炎患者CD3+、CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞絕對(duì)值明顯低于肝硬化患者,呈現(xiàn)出相似的相關(guān)性。

篇7

關(guān)鍵詞：流產(chǎn) 封閉抗體 免疫治療 主動(dòng)

【中圖分類號(hào)】R4 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】B 【文章編號(hào)】1008-1879(2012)02-0068-02

流產(chǎn)是母胎之間的免疫狀態(tài)失衡，復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的發(fā)病率為1%～5%，原因不明者約有50%，其中大約80%以上是與免疫因素相關(guān)。對(duì)此可將復(fù)發(fā)性流產(chǎn)分為非免疫類復(fù)發(fā)性流產(chǎn)和免疫類復(fù)發(fā)性流產(chǎn)。不明原因的復(fù)發(fā)性流產(chǎn)是指排除染色體、解剖、內(nèi)分泌、感染和自身免疫方面的因素后未能發(fā)現(xiàn)其他導(dǎo)致流產(chǎn)的原因，也叫同種免疫類復(fù)發(fā)性流產(chǎn)。我院自2009年9至2011年9月經(jīng)門診篩查出不明原因的復(fù)發(fā)性流產(chǎn)患者116例，予淋巴細(xì)胞免疫治療，效果理想，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料和方法

1.1 對(duì)象。

均為來(lái)本院門診就診的復(fù)發(fā)性流產(chǎn)患者，連續(xù)自然流產(chǎn)2～6次。經(jīng)門診常規(guī)篩查排除遺傳、內(nèi)分泌、感染、生殖器官解剖異常及自身免疫性疾病等，封閉抗體陰性的復(fù)發(fā)性流產(chǎn)患者共116例，年齡21～42歲，平均29.4歲。

1.2 方法。

1.2.1 封閉抗體檢測(cè)方法。

采用補(bǔ)體依賴性淋巴細(xì)胞毒試驗(yàn)檢測(cè)，患者血清為抗血清，丈夫淋巴細(xì)胞為靶細(xì)胞。

1.2.2 淋巴細(xì)胞免疫治療方法。

充分向夫妻雙方告知主動(dòng)免疫治療的意義和風(fēng)險(xiǎn)，并同意接受治療。主動(dòng)免疫原采用符合要求的丈夫（或無(wú)關(guān)第三個(gè)體）的淋巴細(xì)胞，抽取丈夫（或無(wú)關(guān)第三個(gè)體）抗凝外周血30ml，用Ficoll淋巴細(xì)胞分離液提取淋巴細(xì)胞，生理鹽水洗滌3次，加1ml生理鹽水稀釋，于妻子前臂內(nèi)側(cè)分3點(diǎn)作皮下注射，每次0.1ml，活細(xì)胞數(shù)為 （3.0～4.0）×107/ml。

1.2.3 治療時(shí)間。

于計(jì)劃懷孕前3月開(kāi)始行淋巴細(xì)胞免疫治療，每3周1次,共計(jì)4次（一療程）。末次免疫后2周復(fù)查封閉抗體,若已轉(zhuǎn)為陽(yáng)性,即可考慮懷孕。鼓勵(lì)在療程結(jié)束后3個(gè)月內(nèi)懷孕，如成功妊娠后予以加強(qiáng)治療。若陽(yáng)轉(zhuǎn)后仍未能懷孕，每隔8周左右再注射一次以維持封閉抗體的濃度。陰性者繼續(xù)進(jìn)行下一個(gè)療程的免疫治療直至封閉抗體轉(zhuǎn)為陽(yáng)性后再考慮受孕。確診懷孕后每隔2周注射淋巴細(xì)胞一次直至妊娠12周。

1.3 妊娠成功標(biāo)準(zhǔn)指標(biāo)。

封閉抗體陽(yáng)性并成功妊娠至12周。

2 結(jié)果

接受丈夫（或無(wú)關(guān)第三個(gè)體）淋巴細(xì)胞主動(dòng)免疫治療116例，其中108例為接受一個(gè)療程的淋巴細(xì)胞免疫免疫后復(fù)查封閉抗體陽(yáng)性，轉(zhuǎn)陽(yáng)率93%；6例為接受2個(gè)療程后復(fù)查封閉抗體陽(yáng)性；2例進(jìn)行2個(gè)療程復(fù)查封閉抗體仍為陰性。成功妊娠者中有74例足月分娩，2例早產(chǎn)，1例晚孕失訪，27例目前成功妊娠，治療成功率為89.65%。接受免疫療法患者分娩的76嬰幼兒隨訪結(jié)果，2例早產(chǎn)兒體重2.2kg、2.0kg，出生后轉(zhuǎn)兒科健康出院；其余體重均在2.5～3.7kg，出生時(shí)表型正常，生長(zhǎng)發(fā)育均正常，子代身體發(fā)育與智力發(fā)育均與同齡兒童無(wú)顯著性差異。

3 討論

人類白細(xì)胞抗原是是廣泛存在人體組織及有核細(xì)胞表面的并可引起強(qiáng)烈排除反應(yīng)的抗原。現(xiàn)代生殖免疫學(xué)認(rèn)為妊娠是成功的半同種免疫移植，正常妊娠時(shí)，夫妻雙方HLA抗原不相容，胚胎所攜帶的父源性抗原能刺激母體免疫系統(tǒng)產(chǎn)生封閉抗體。封閉抗體是防止輔T淋巴細(xì)胞識(shí)別胎兒抗原的抑制物，可以和滋養(yǎng)細(xì)胞結(jié)合并將其偽裝，防止母體對(duì)其的識(shí)別和排斥，并加速滋養(yǎng)細(xì)胞的生長(zhǎng)。不明原因的復(fù)發(fā)性流產(chǎn)患者與母體缺乏封閉抗體有關(guān)。封閉抗體的不足導(dǎo)致母體對(duì)胚胎產(chǎn)生免疫攻擊，母體對(duì)胚胎產(chǎn)生強(qiáng)烈排除以致反復(fù)流產(chǎn)［1］。

據(jù)此產(chǎn)生了采用患者丈夫或無(wú)關(guān)個(gè)體淋巴細(xì)胞進(jìn)行主動(dòng)免疫的治療方法，以達(dá)到母胎間的細(xì)胞性免疫排斥反應(yīng)減少流產(chǎn)率的發(fā)生。

在臨床工作中應(yīng)嚴(yán)格選用病例，對(duì)于同一的連續(xù)2次或2次以上流產(chǎn)者并排除遺傳、內(nèi)分泌、感染、生殖器官解剖異常及自身免疫性疾病等患者納入治療對(duì)象。供血者治療前完善相關(guān)血液的檢查包括血常規(guī)、凝血功能、肝炎系列全套、艾滋病抗體、梅毒血清學(xué)檢查、Rh血型及致畸四項(xiàng)的檢查。經(jīng)過(guò)治療后有114例封閉抗體轉(zhuǎn)為陽(yáng)性，101例成功妊娠，76例娩出健康活嬰，子代身體發(fā)育與智力發(fā)育均與同齡兒童無(wú)顯著性差異，與林其德等［2］的報(bào)道相似。這說(shuō)明經(jīng)過(guò)淋巴細(xì)胞免疫治療后母體內(nèi)封閉抗體形成，免疫耐受形成，可保護(hù)胚胎免受母體免疫攻擊，可有效的治療不明原因的復(fù)發(fā)性流產(chǎn)患者。同時(shí)淋巴細(xì)胞免疫治療操作相對(duì)簡(jiǎn)單，成功率高，和其他混合型淋巴細(xì)胞治療相比副作用小，有利于避免母體對(duì)紅細(xì)胞或血小板等抗原致敏的優(yōu)點(diǎn)?？傊畬?duì)于封閉抗體陰性的RSA患者應(yīng)用淋巴細(xì)胞主動(dòng)免疫治療能提高封閉抗體的陽(yáng)性率及妊娠的成功率。淋巴細(xì)胞主動(dòng)免疫治療復(fù)發(fā)性流產(chǎn)安全有效。

參考文獻(xiàn)

篇8

【摘要】目的 研究分析微淋巴管密度(micro-lymphatic vessel density, MLVD)和內(nèi)皮細(xì)胞特異性分子-1 (Endothelial cell specific molecule-1, ESM-1)在膽囊癌組織中的表達(dá)情況及相關(guān)性。 方法 應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)膽囊癌組織MLVD和ESM-1的表達(dá)情況，分析二者在膽囊癌組織表達(dá)的相關(guān)性。 結(jié)果 膽囊癌組織中MLVD和ESM-1的表達(dá)比慢性膽囊炎組織的表達(dá)差異明顯，顯著升高(t=4.025和χ2=20.833，P均

【關(guān)鍵詞】 膽囊癌；微淋巴管密度；內(nèi)皮細(xì)胞特異性分子-1

研究證實(shí)，D2-40是一種高度特異和高度靈敏的淋巴管標(biāo)記物，它的發(fā)現(xiàn)促進(jìn)了腫瘤淋巴轉(zhuǎn)移的研究成為熱點(diǎn)［1］。大量研究表明，ESM-1與多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。ESM-1不僅影響腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞免疫學(xué)特性而且與腫瘤血管生成密切相關(guān)，ESM-1在腫瘤血管生成過(guò)程中起到重要的調(diào)節(jié)作用［2］。本研究通過(guò)分析膽囊癌中MLVD和ESM-1的表達(dá)及相關(guān)性，探討ESM-1與腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的相關(guān)性。

資料和方法

一 一般資料

選取中山大學(xué)附屬第五醫(yī)院普通外科2007年1月至2010年1月收治，經(jīng)病理組織學(xué)確診且術(shù)后標(biāo)本蠟塊保存完好的膽囊腺癌病理標(biāo)本47例。隨機(jī)選取同期慢性膽囊炎標(biāo)本25例做為對(duì)照組。患者年齡為36-72歲，中位年齡53.7歲；病理組織學(xué)分級(jí)：高分化腺癌15例，中分化腺癌20例，低分化腺癌12例。所有病例術(shù)前均未接受過(guò)新輔助化療及放射治療，并除外合并其他惡性腫瘤病例。

二 材料和方法

1 主要試劑:鼠抗人單克隆抗體D2-40、ESM-1單克隆抗體、PV9000檢測(cè)試劑盒、DAB顯色試劑盒、生物素標(biāo)記抗小鼠IgG等均購(gòu)自武漢博士德生物工程有限公司。

2 實(shí)驗(yàn)方法：膽囊癌組織中D2-40標(biāo)記的微淋巴管密度和ESM-1表達(dá)的測(cè)定。所有標(biāo)本經(jīng)40g/L甲醛溶液固定，常規(guī)脫水包埋，Envision免疫組化二步法染色。

3 結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn) 微淋巴管密度(MLVD)計(jì)數(shù)：D2-40蛋白定位于細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞膜中，陽(yáng)性表達(dá)為出現(xiàn)棕黃色或褐色顆粒。D2-40陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)及MLVD計(jì)數(shù)參照Weidner方法并加以改進(jìn)，任何被染成棕黃色孤立的內(nèi)皮細(xì)胞，條索狀、裂隙狀、管狀細(xì)胞團(tuán)，只要能與臨近的腫瘤細(xì)胞或其它結(jié)締組織分開(kāi)，即可視為一個(gè)微淋巴管，而不以是否形成管腔為計(jì)數(shù)單位。高倍鏡下記錄4個(gè)視野內(nèi)的微淋巴管數(shù)，取其平均數(shù)作為該腫瘤的MLVD值，測(cè)量窗面積為0.906mm2。各組MLVD用（均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差）表示。ESM-1蛋白以細(xì)胞質(zhì)內(nèi)明顯有黃色或棕黃色顆粒為陽(yáng)性。首先按陽(yáng)性細(xì)胞百分率記分：≤5%為0分，6%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，≥76%為4分。其次按著色強(qiáng)度分為4個(gè)等級(jí)，無(wú)著色為0分，淡黃色為1分，黃色為2分，棕黃色為3分，最后將兩者積分乘積為0表示陰性( - )，1為陽(yáng)性，其中1～2 表示弱陽(yáng)性( + )，3～4表示陽(yáng)性( + + )，≥5為強(qiáng)陽(yáng)性( + + + )。

三 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

使用SPSS12.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計(jì)量資料采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)；MLVD與ESM-1表達(dá)的相互關(guān)系采用Spearman等級(jí)相關(guān)分析；檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)均取為p＜0.05差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1 膽囊癌組織中MLVD和ESM-1的表達(dá)。D2-40陽(yáng)性表達(dá)定位在淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞，從形態(tài)上看，D2-40陽(yáng)性的脈管符合淋巴管的特征：管壁較薄，為單層內(nèi)皮細(xì)胞構(gòu)成，而含有紅細(xì)胞的脈管即血管染色為陰性。在膽囊癌組織和慢性膽囊炎組織中均可見(jiàn)到陽(yáng)性染色的淋巴管，膽囊癌組織中絕大多數(shù)淋巴管位于腫瘤間質(zhì)組織內(nèi)，管壁薄，管腔大小不一，形態(tài)不規(guī)則，部分淋巴管內(nèi)可見(jiàn)癌細(xì)胞侵入。膽囊癌組織中MLVD和ESM-1的表達(dá)比慢性膽囊炎組織的表達(dá)差異明顯，顯著升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=4.025和χ2=20.833，P均

2 膽囊癌組織中MLVD和ESM-1的表達(dá)的相關(guān)性分析。根據(jù)ESM-1的評(píng)分值與MLVD值的關(guān)系，作Spearman等級(jí)相關(guān)分析，表明兩者之間存在密切相關(guān)(r＝0.661，P＜0.05)。

4（16.0%）

討 論

ESM-1是1996年由法國(guó)科學(xué)家Lassalle等從人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞cDNA文庫(kù)中克隆出的一種新型內(nèi)皮細(xì)胞特異性分子。研究證實(shí)，ESM-1是一種主要存在于細(xì)胞表面、細(xì)胞外基質(zhì)和體液中的硫酸皮膚素蛋白多糖，其與腫瘤的形成、發(fā)展和侵襲轉(zhuǎn)移等生理病理過(guò)程有關(guān)。目前認(rèn)為ESM-1在人類腫瘤中明顯高表達(dá)，通過(guò)酶聯(lián)免疫學(xué)方法可以發(fā)現(xiàn)在晚期肺癌病人血清中ESM-1明顯增高。近年來(lái)，ESM-1mRNA水平也被認(rèn)為是包括肺癌在內(nèi)的幾種惡性腫瘤預(yù)后不佳的最重要分子標(biāo)記物之一，同時(shí)研究發(fā)現(xiàn)在腫瘤發(fā)生的動(dòng)物模型中ESM-1與腫瘤進(jìn)展有明顯的相關(guān)性［3］。

腫瘤淋巴道轉(zhuǎn)移的機(jī)制目前仍不十分清楚，其中一個(gè)重要的問(wèn)題就是腫瘤組織中是否除了新生血管外還存在新生淋巴管？后者是否同新生血管一樣，也為腫瘤提供了轉(zhuǎn)移通道，雖然淋巴管對(duì)腫瘤轉(zhuǎn)移的作用非常明顯，但由于長(zhǎng)期缺乏適當(dāng)?shù)牧馨蛢?nèi)皮特異性標(biāo)記物和對(duì)淋巴管生成因子的認(rèn)識(shí)，使得我們對(duì)腫瘤淋巴管生成的研究相對(duì)滯后于血管生成。最近隨著一種新型具有高度特異性、敏感性的淋巴管標(biāo)記物D2-40的出現(xiàn)，腫瘤新生淋巴管形成與腫瘤轉(zhuǎn)移的關(guān)系成為關(guān)注焦點(diǎn)。D2-40是新近發(fā)現(xiàn)的一種單克隆抗體，可與分子量為40KD的唾液酸糖蛋白M2A特異性結(jié)合，而M2A表達(dá)于淋巴管內(nèi)皮，血管內(nèi)皮不表達(dá)，經(jīng)過(guò)組織超微結(jié)構(gòu)和其它淋巴管標(biāo)記物對(duì)比證實(shí)，此抗體對(duì)淋巴管內(nèi)皮具有很強(qiáng)的特異性和敏感性。盡管惡性血管腫如血管肉瘤中的惡性血管內(nèi)皮細(xì)胞也為D2-40陽(yáng)性，但由于非血管源性腫瘤中淋巴管及血管內(nèi)皮為良性，D2-40可以廣泛用于腫瘤新生淋巴管的研究［4］。

最近研究顯示血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子與HGF/SF結(jié)合24小時(shí)后能導(dǎo)致人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞ESM-1水平的上調(diào)，同時(shí)VEGF本身和HGF/SF特殊信號(hào)受體-蛋氨酸也伴隨著上調(diào)，這說(shuō)明在腫瘤的進(jìn)展過(guò)程中ESM-1的表達(dá)與腫瘤血管形成有明顯的相關(guān)性［5］。

本實(shí)驗(yàn)利用特異性淋巴管內(nèi)皮標(biāo)記物D2-40應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法進(jìn)行膽囊癌組織MLVD的測(cè)定，以及ESM-1在膽囊癌中表達(dá)情況的研究，分析MLVD和ESM-1表達(dá)的相關(guān)性，探討ESM-1與腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系。結(jié)果表明MLVD和ESM-1在膽囊癌組織中高表達(dá)，MLVD和ESM-1在膽囊癌組織中的表達(dá)具有正相關(guān)性。說(shuō)明了膽囊癌組織中ESM-1促進(jìn)了MLVD的高表達(dá)，提示ESM-1參與了膽囊癌淋巴管的形成以及腫瘤細(xì)胞的淋巴轉(zhuǎn)移，其具體機(jī)制尚待進(jìn)一步研究。

資助基金：珠海市衛(wèi)生局醫(yī)學(xué)科研基金（項(xiàng)目編號(hào)2010060）

參考文獻(xiàn)

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［2］ 向昕, 趙文博, 王欣. 內(nèi)皮細(xì)胞特異性分子-1與腫瘤關(guān)系的研究進(jìn)展. 廣州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào), 2008, 36(6):67-71.

［3］ 徐大林, 桂淑玉, 李永懷, 等. 內(nèi)皮細(xì)胞特異性分子-1在肺癌組織中的表達(dá)及其臨床意義. 安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào), 2007, 42(4):363-366.

［4］ Gomaa AH, Yaar M, Bhawan J. Cutaneous immunoreactivity of ` antibody beyond the lymphatics. Am J Dermatopathol, 2007, 29(1):18-21.

篇9

[關(guān)鍵詞] 消化道腫瘤；化療前后；T淋巴細(xì)胞亞群

[中圖分類號(hào)] R734 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1673-7210（2014）08（a）-0040-03

Changes of lymphocyte subsets and its significance in patients with digestive tract tumor before and after chemotherapy

PENG Jieya1 HE Yajun1 ZENG Xiaodan2

1.Department of Clinical Laboratory， Guangzhou Red Cross Hospital， Guangdong Province， Guangzhou 510220， China； 2.Laboratory Medical Science， Guangzhou Medical University， Guangdong Province， Guangzhou 510182， China

[Abstract] Objective To investigate the T cell subsets （CD3+） T cells， T lymphocytes （CD4+）， T lymphocytes （CD8+） and CD4+/CD8+ ratio digestive tract tumor before and after chemotherapy changes and clinical significance of patients with digestive tract tumor before and after chemotherapy. Methods Flow cytometry was used to analyze the CD3+， CD4+， CD8+ cell percentage and the ratio of CD4+/CD8+ in different types of gastrointestinal cancer patients before and after chemotherapy and the healthy （control group）. Results Compared with the control group， the former chemotherapy CD3+， CD4+， CD4+/CD8+ ratio of gastrointestinal cancer patients were lower than that of control group （P < 0.05）， and CD8+ was higher than the control group （P < 0.05）， the differences were statistically significant. Colon cancer and stomach cancer patients after chemotherapy CD3+， CD4+ percentages were higher than before chemotherapy （P < 0.05）， the percentage of CD8+ was lower （P < 0.05）， the differences were statistically significant. Patients with rectal cancer after chemotherapy CD3+ percentage was higher before chemotherapy （P < 0.05）， the percentage of CD8+ was lower （P < 0. 05）， the differences were statistically significant； while CD4+ and CD4+/CD8+ ratio had no statistical significance （P > 0.05）. Conclusion For the digestive tract tumor， detecting the changes of T lymphocyte subsets to understand the immune dynamic， in determining the clinical curative effect， and assess the prognosis monitoring， etc.， all have very important clinical significance.

[Key words] Digestive tract tumor； Before and after chemotherapy； T-lymphocyte subsets

T淋巴細(xì)胞是一種胸腺依賴性淋巴細(xì)胞，是構(gòu)成機(jī)體免疫防御系統(tǒng)的重要成分，隨著對(duì)腫瘤免疫機(jī)制的了解和腫瘤免疫治療的應(yīng)用，越來(lái)越多的細(xì)胞免疫檢測(cè)指標(biāo)被用來(lái)監(jiān)測(cè)腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和判斷治療效果及預(yù)后，目前應(yīng)用較廣泛的是T細(xì)胞亞群的測(cè)定，對(duì)于判斷癌癥患者的免疫狀態(tài)具有重要的意義。T淋巴細(xì)胞包括兩個(gè)主要亞群（CD4和CD8）。在正常情況下，機(jī)體內(nèi)兩個(gè)T細(xì)胞亞群之間，保持一定的數(shù)量比例，維持平衡狀態(tài)。當(dāng)機(jī)體發(fā)生腫瘤時(shí)，該平衡狀態(tài)被破壞，嚴(yán)重影響兩個(gè)T細(xì)胞亞群之間的數(shù)量比例，導(dǎo)致機(jī)體免疫功能紊亂[1]。本研究通過(guò)總結(jié)各類消化道腫瘤患者化療前后T淋巴細(xì)胞亞群變化，探討各類消化道腫瘤患者化療前后免疫功能的變化。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2010年1月～2013年6月廣州市紅十字會(huì)醫(yī)院（以下簡(jiǎn)稱“我院”）收治的各類消化道腫瘤患者在化療前1 d及化療后15 d均檢測(cè)T淋巴細(xì)胞含量的166例成人患者資料，其中，男108例，女58例，年齡46～82歲。相關(guān)腫瘤類型均得到病理學(xué)形態(tài)證實(shí)。胃癌21例，結(jié)腸癌100例，直腸癌45例。按《臨床病診斷及療效標(biāo)準(zhǔn)》[2]中的消化道疾病診斷，經(jīng)每周期方案化療結(jié)束后15 d可經(jīng)相關(guān)檢驗(yàn)驗(yàn)證取得療效。另以30名正常人（來(lái)自我院體檢中心健康體檢者）作為對(duì)照組，其中，男16名，女14名，年齡19～74歲。

1.2 方法

各類消化道腫瘤患者在化療前1 d及化療后15 d均檢測(cè)T淋巴細(xì)胞含量。清晨空腹抽取靜脈血2 mL，EDTA-2K抗凝，取患者新鮮抗凝血標(biāo)本100 μL，放入樣品測(cè)定管，加入相應(yīng)的熒光標(biāo)記單克隆抗體，振蕩混勻，室溫下避光孵育20～30 min，加入溶血素，溶血完畢后上機(jī)檢測(cè)。采用流式細(xì)胞儀BD Facs calibur，上機(jī)獲取10 000個(gè)淋巴細(xì)胞，對(duì)CD3+、CD4+、CD8+ T淋巴細(xì)胞的百分比進(jìn)行檢測(cè)分析。本次實(shí)驗(yàn)所有檢測(cè)實(shí)行全過(guò)程質(zhì)量控制。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，兩組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)、配對(duì)t檢驗(yàn)；以P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

與對(duì)照組相比，消化道腫瘤患者化療前CD3+、CD4+、CD4+/CD8+比例均較低（P < 0.05），CD8+細(xì)胞百分比明顯升高（P < 0.05），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。消化道腫瘤患者化療后CD3+、CD4+百分比和CD4+/CD8+比值較化療前均增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.01或P < 0.05），CD8+降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。見(jiàn)表1。

不同病理類型的腫瘤患者化療前后T細(xì)胞亞群結(jié)果比較顯示，結(jié)腸癌和胃癌患者化療后CD3+、CD4+百分比較化療前均增高（P < 0.05），CD8+降低（P < 0.05），差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；直腸癌患者化療后CD3+百分比較化療前增高（P < 0.05），CD8+百分比降低（P < 0.05），差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，化療前后CD4+、CD4+/CD8+比值差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）。見(jiàn)表2。

表1 消化道腫瘤患者化療前后外周血T淋巴細(xì)胞亞群的表達(dá)（x±s）

注：與對(duì)照組比較，#P < 0.05；與化療前比較，*P < 0.05，**P < 0.01

表2 不同病理類型消化道腫瘤患者化療前后T細(xì)胞亞群比較（x±s）

注：與同類型化療前比較，#P < 0.05，*P > 0.05

3 討論

腫瘤與免疫的關(guān)系復(fù)雜，免疫功能低下或抑制均有可能導(dǎo)致腫瘤發(fā)生。外周血T細(xì)胞亞群是經(jīng)研究證實(shí)能較好反映機(jī)體細(xì)胞免疫狀態(tài)的指標(biāo)。免疫學(xué)機(jī)制中，CD3+體現(xiàn)總細(xì)胞免疫狀態(tài)。CD4+稱為輔T淋巴細(xì)胞，和其他免疫細(xì)胞一起參與免疫應(yīng)答，以達(dá)到抗腫瘤作用。文獻(xiàn)報(bào)道[3-5]，CD3+、CD4+淋巴細(xì)胞減少會(huì)導(dǎo)致免疫功能低下。CD8+通過(guò)自身及抑制因子在免疫反應(yīng)中起負(fù)向作用，抑制CD4+細(xì)胞和B細(xì)胞功能，從而抑制抗體形成及細(xì)胞免疫反應(yīng)，CD8+細(xì)胞增多有利于腫瘤持續(xù)增長(zhǎng)，而在腫瘤發(fā)展過(guò)程中又可誘導(dǎo)和激發(fā)CD8+細(xì)胞，進(jìn)而促進(jìn)腫瘤增殖。CD3+、CD4+細(xì)胞能促進(jìn)效應(yīng)細(xì)胞抗腫瘤作用，CD3+、CD8+細(xì)胞主要為抑制性T細(xì)胞，抑制機(jī)體免疫應(yīng)答。研究證實(shí)，在腫瘤或其他疾病進(jìn)展過(guò)程中，機(jī)體免疫功能常呈現(xiàn)紊亂，其中一個(gè)明顯表現(xiàn)為T淋巴細(xì)胞亞群在數(shù)量上和功能上發(fā)生改變[6-7]。在消化道腫瘤形成中，由于腫瘤細(xì)胞會(huì)產(chǎn)生一些免疫抑制因子，使得CD4+減少，CD8+反應(yīng)性增多；同時(shí)，由于增多的CD8+細(xì)胞可能是以抑制性T細(xì)胞（TS）居多，這變相對(duì)CD4+細(xì)胞產(chǎn)生一定抑制作用，使CD4+/CD8+比值下降。正常生理狀態(tài)下，CD4+/CD8+處于相對(duì)穩(wěn)定狀態(tài)，實(shí)現(xiàn)機(jī)體細(xì)胞免疫功能穩(wěn)定。若T細(xì)胞總數(shù)或CD4+/CD8+ T細(xì)胞比值發(fā)生異常時(shí)，反映機(jī)體正常T細(xì)胞亞群狀態(tài)被打破，視為免疫調(diào)節(jié)紊亂，宿主免疫功能低下或受抑制，易發(fā)生腫瘤或自身免疫疾病，機(jī)體正常的免疫功能會(huì)發(fā)生變化，呈現(xiàn)下降趨勢(shì)。

本研究結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，消化道腫瘤患者化療前CD3+、CD4+百分比較低（P < 0.05），CD8+較對(duì)照組升高（P < 0.05），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。提示腫瘤患者確實(shí)存在免疫功能低下表現(xiàn)，與國(guó)內(nèi)外報(bào)道相符[8-9]。而CD4+/CD8+比值明顯下降，說(shuō)明消化道腫瘤患者體內(nèi)細(xì)胞免疫功能處于抑制狀態(tài)，對(duì)識(shí)別和殺傷癌變細(xì)胞的能力下降，引起機(jī)體免疫平衡狀態(tài)被打破?；熀驝D3+、CD4+較化療前有所增高（P < 0.01），趨于正常，化療后CD4+/CD8+比值較化療前增高（P < 0.05），與文獻(xiàn)報(bào)道相符[10-11]。提示消化道腫瘤患者體內(nèi)免疫功能有不同程度的恢復(fù)[12]。CD4+/CD8+比值用于反映患者淋巴系統(tǒng)的機(jī)能狀態(tài)，但目前對(duì)于腫瘤患者化療效果、淋巴細(xì)胞亞群以及CD4+/CD8+并沒(méi)有一個(gè)統(tǒng)一的參考標(biāo)準(zhǔn)。同時(shí)，不同腫瘤類型可導(dǎo)致T淋巴細(xì)胞亞群發(fā)生不同程度的改變，在臨床中通過(guò)比較化療前后淋巴細(xì)胞亞群變化情況，客觀地反映機(jī)體的免疫狀況，判斷患者的病情進(jìn)展以及評(píng)價(jià)療效[13]。

本研究結(jié)果顯示，直腸癌CD4+在化療前后的變化不如結(jié)腸癌和胃癌CD4+在化療前后的變化明顯，說(shuō)明直腸癌化療對(duì)CD4+的影響不顯著，這與部分文獻(xiàn)報(bào)道[14]不符。探究其原因，可能由于本次研究病例中有部分患者已接受多周期化療療程，患者細(xì)胞免疫功能逐漸減低，且細(xì)胞活化能力較前減低，同時(shí)或許與患者T淋巴細(xì)胞水平、年齡有關(guān)，更與其選擇的化療方案，如FOLFOX4（奧沙利鉑+5-氟尿嘧啶+亞葉酸鈣）、FOLFRI（伊立替康+5-氟尿嘧啶+亞葉酸鈣）或XELOX（奧沙利鉑+卡培他濱）等方案的不同、療程次數(shù)、療程長(zhǎng)短等因素有關(guān)。在不同病理類型的腫瘤患者中，化療后CD4+/CD8+比值雖有增高，但直腸癌和胃癌化療前和化療后CD4+/CD8+的變化差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05），與部分文獻(xiàn)報(bào)道不符[15-16]。究其原因主要為CD4+化療前后變化值不明顯所造成的。另外，消化道腫瘤患者外周血總T細(xì)胞CD3+、CD4+和CD4+/CD8+比值在化療后均高于化療前，提示化療改變了體內(nèi)的免疫狀態(tài)，而T淋巴細(xì)胞增高提示化療后腫瘤負(fù)荷減少，能一定程度恢復(fù)細(xì)胞免疫調(diào)控能力。

綜上所述，通過(guò)檢測(cè)消化道腫瘤患者T淋巴細(xì)胞亞群化療前后的變化，對(duì)了解機(jī)體的免疫動(dòng)態(tài)，有著重要的臨床意義。同時(shí)，也為免疫調(diào)節(jié)治療和免疫增強(qiáng)治療提供理論依據(jù)。

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篇10

【關(guān)鍵詞】 狼瘡腎炎

關(guān)鍵詞: 狼瘡腎炎;淋巴細(xì)胞亞群;免疫球蛋白

摘 要:目的 探討狼瘡性腎炎（LN）患者外周血淋巴細(xì)胞亞群、活化狀態(tài)和免疫球蛋白的變化及其相互關(guān)系. 方法 采用流式細(xì)胞儀和酶聯(lián)檢測(cè)儀對(duì)21例LN進(jìn)行了研究. 結(jié)果 ①LN患者CD3+ +CD4+ （0.24±0.10），CD45RA+ （0.29±0.06），CD45RO+ （0.02±0.02），CD4+ +CD45RA+ （0.11±0.06），CD4+ CD45RO+ （0.05±0.04）細(xì)胞比例明顯減少，與對(duì)照組（0.41±0.09，0.45±0.11，0.05±0.05，0.21±0.07，0.08±0.02）比較P

Keywords:lupus nephritis;lymphocyte subsets;immunglob-ulins

Abstract:AIM To investigate the distribution of activated state of lymphocyte in peripheral blood and levels of serum immunoglobulins in patients with lupus nephritis.METHODS The immunophenotype of peripheral blood lympho-cytes was analysed by flowcytometry with double-labeling an-ti-CD3，anti-CD4，anti-CD5，anti-CD19，anti-CD43，anti-CD45RA，anti-CD45RO，HLA-DR mAbs，while the levels of serum IgE，IgG，IgA，and IgM were detected by ELISA.The experimental groups were Group A（9cases with nephritic syndrome），Group B（12cases without nephritic syndrome）and control group（30cases of normal volunteers）.RESULTS ①The percentages of CD3+ +CD4+ （0.24±0.10），CD45RA+ （0.29±0.06），CD45RO+ （0.02±0.02），CD4+ +CD45RA+ （0.11±0.06），CD4+ +CD45RO+ （0.05±0.04）cells in LN patients were lower than those in normal volunteers（0.41±0.09，0.45±0.11，0.05±0.05，0.21±0.07，0.08±0.02）（P

+ （0.05±0.02）cells in LN patients were higher than those in normal volunteers（0.06±0.04，0.04±0.04，0.01±0.004，0.01±0.01）（P

0 引言

系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）是一種損傷多臟器的自身免疫性疾病，表現(xiàn)為多種自發(fā)抗體的產(chǎn)生和T淋巴細(xì)胞數(shù)量及功能異常［1，2］ .狼瘡性腎炎（LN）免疫功能的紊亂與其不盡相同，我們應(yīng)用流式細(xì)胞儀和酶聯(lián)檢測(cè)儀，對(duì)LN患者外周血淋巴細(xì)胞亞群活化狀態(tài)及免疫球蛋白的變化及相互關(guān)系進(jìn)行研究如下.

1 對(duì)象和方法

1.1 對(duì)象 我院1994-01/1999-12住院患者21例，均為女性，年齡19～44（27±9）歲.全部診斷符合1982年美國(guó)風(fēng)濕協(xié)會(huì)修訂的標(biāo)準(zhǔn)，且均處于活動(dòng)期.根據(jù)有無(wú)腎病綜合征（NS）表現(xiàn)分為NS組（9例）和非NS組（12例）.正常志愿者30例，均為女性，年齡25～49（33±8）歲.

1.2 方法 使用Ficoll（1077g?L-1 ）分離外周血單個(gè)核細(xì)胞，PBS洗滌2次，以2×1010 ?L-1 懸于PBS中，按文獻(xiàn)［3］方法進(jìn)行標(biāo)記.所用的異硫氰酸熒光素（FITC）標(biāo)記的mAb為CD4，CD19，HLA-DR，藻紅蛋白（PE）標(biāo)記的mAb為CD3，CD5，CD43，CD45RA，CD45RO，HLA-DR.以標(biāo)記FITC的抗鑰孔蟲(chóng)戚血藍(lán)素mAb IgG2a和標(biāo)記PE的抗鑰孔蟲(chóng)戚血藍(lán)素mAb IgG1處理細(xì)胞作為陰性對(duì)照.FACSort流式細(xì)胞儀讀取數(shù)據(jù)，每個(gè)樣本讀5000～10000細(xì)胞.Cellquest軟件分析.采用ELISA法檢測(cè)血清IgE（試劑盒由天津新傳生物技術(shù)有限公司提供），IgG，IgM，IgA水平，同時(shí)檢測(cè)血尿素、血肌肝、血清白蛋白及24h尿蛋白排出量.

統(tǒng)計(jì)學(xué)處理:所有數(shù)值均采用x ±s表示，組間采用t檢驗(yàn)分析.

2 結(jié)果

2.1 外周血淋巴細(xì)胞免疫分型 LN患者CD3+ +CD4+ ，CD45RA+ ，CD45RO+ ，CD4+ +CD45RA+ ，CD4+ +CD45RO+ 細(xì)胞比例明顯減少（與對(duì)照組比較，P

表1 LN患者外周血淋巴細(xì)胞分布　略

2.2 外周血淋巴細(xì)胞活化狀態(tài) LN患者HLA-DR+ ，CD19+ +HLA-DR+ ，CD19+ +CD43+ ，CD19+ +CD5+ 細(xì)胞比例明顯增高（與對(duì)照組比較，P

表2 LN患者外周血淋巴細(xì)胞活化狀態(tài)　略

2.3 血清免疫球蛋白的變化 LN患者IgE水平明顯升高（與對(duì)照組相比，NS組P

表3 LN患者血清免疫球蛋白水平　略

3 討論

T淋巴細(xì)胞是參與機(jī)體免疫調(diào)節(jié)最重要的細(xì)胞群之一，其亞群之間相互協(xié)調(diào)作用維持著機(jī)體正常的免疫功能

［4］ .SLE是一種多系統(tǒng)、多臟器受累的自身免疫性疾病，存在著B(niǎo)細(xì)胞多克隆活化和T淋巴細(xì)胞的異常［1，2］ .而SLE患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群的異常改變與LN患者并不相同［5］ .前者CD4+ /CD8+ 比值增高，而LN患者CD4+ /CD8+ 比值下降［5，6］ ，并且蛋白尿較重者CD4+ /CD8+ 比值下降更為明顯.CD4+ 細(xì)胞有兩種亞群，一種為CD4+ +CD45RO+ 細(xì)胞，它可作用于可溶性抗原，誘導(dǎo)B細(xì)胞分泌免疫球蛋白;另一種為CD4+ +CD45RA+ 細(xì)胞，可引起前CD8+ 抑制細(xì)胞轉(zhuǎn)變成為CD8+ 效應(yīng)抑制細(xì)胞.本結(jié)果顯示LN患者CD45RA+ ，CD45RO+ ，CD4+ +CD45RA+ ，CD4+ +CD45RO+ 均降低，這可能與轉(zhuǎn)化終止、中間型增加有關(guān)，有待于今后研究.作者等研究發(fā)現(xiàn)，伴有NS表現(xiàn)的LN患者CD4+ /CD8+ 比值下降較不伴有NS表現(xiàn)的LN患者更明顯，且CD4+ /CD8+ 比值下降與CD4+ 凋亡增加有關(guān)［6］ ;活化的CD4+ 細(xì)胞減少可能是引起LN發(fā)病的原因［7］ .本結(jié)果提示，CD4+ +CD45RA+ ，CD4+ CD45RO+ 細(xì)胞減少可能是CD4+ 細(xì)胞減少另一個(gè)原因，但其真正原因目前尚無(wú)定論.

本結(jié)果顯示，LN患者CD5+ 下降，CD19+ 升高，但與對(duì)照組相比P>0.05;HLA-DR+ ，CD19+ +HLADR+ ，CD19+ +CD43+ ，CD19+ +CD5+ 較對(duì)照組升高（P

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